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流式凋亡檢測 Apoptosis Detection

實驗原理

  細(xì)胞凋亡(Cell apoptosis)是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,細(xì)胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等的作用,它并不是病理條件下的損傷,而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。
  細(xì)胞凋亡檢測的方法很多,我們采用的Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡的原理:磷脂酰絲氨酸(Phosphatidyl serine, PS)正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在細(xì)胞凋亡的早期,PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進行EGFP融合、熒光素(FITC、PE)或biotin標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針。

實驗流程

 

 

 

實驗結(jié)果展示

 

圖1 采用流式細(xì)胞儀Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡