遺傳霉素(G-418)的作用
遺傳霉素(geneticin, G418)又稱新霉素,是一種氨基糖苷類抗生素, 是細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染最常用的抗性篩選試劑。G418能阻斷蛋白質(zhì)合成,對細菌、酵母、高等植物以及哺乳動物細胞均具有氨基糖苷類毒性,用于真核細胞從轉(zhuǎn)座子Tn5和Tn601穩(wěn)定轉(zhuǎn)染新霉素(neo)抗性基因的選擇和維持。經(jīng)常用于基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面。
基本參數(shù):
G418 :白色粉末,融點138~144℃,溶于水、甲醇。
CAS No.:108321-42-2
分子式 :C20H40N4O10.2H2SO4
分子量 :692.71
效價: >700 ug/mg
使用方法:
由于各真核細胞系對G418敏感度不同,各新細胞系或株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時殺死非穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞所需用量需要通過實驗優(yōu)化。最適用量通過建立細胞死亡曲線獲得。將細胞稀釋至1000cell/ml,每孔100ul加入有培養(yǎng)基的24孔板,將每孔中的G418濃度稀釋至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12個級別, 培養(yǎng)10-14天,以細胞全部死亡最低濃度為基準,一般400-800左右,篩選時比該濃度再高一個級別,維持時使用篩選濃度的一半即可。
儲運:室溫下運輸, 干粉在室溫下儲存,溶液于-20℃儲存。
北京諾博萊德科技有限公司備有現(xiàn)貨產(chǎn)品遺傳霉素(G-418),常賣規(guī)格為100mg,科研實驗用試劑。遺傳霉素(G-418)類似慶大霉素。在細菌,酵母,原生動物,高等植物及哺乳動物這類原核或真核細胞中抑制蛋白合成。廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)化了含抗遺傳霉素基因質(zhì)粒的真核細胞的篩選。