對BD Horizon? Fixable Viability Stain 620染色的人Jurkat細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞分析。將來自人 Jurkat（急性 T 細(xì)胞白血病，ATCC TIB-152）細(xì)胞系的細(xì)胞用 0.025% DMSO（左圖）或 5 μM 喜樹堿（右圖）處理 16 小時(shí)，然后用 BD Horizon? Fixable Viability Stain 620 （Cat.No.564996）在無血清緩沖液中。然后將細(xì)胞保持不固定狀態(tài)（實(shí)線直方圖）或固定在BD Cytofix?固定緩沖液（Cat.No. 554655） 并在 BD Phosflow? 燙發(fā)/洗滌緩沖液 I 中透化（Cat.編號 557885）（虛線直方圖）。直方圖來自具有 Jurkat 細(xì)胞前向和側(cè)向光散射特征的門控事件。使用BD LSRFortessa?流式細(xì)胞術(shù)系統(tǒng)進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。請注意，F(xiàn)VS620還與BD Phosflow? Perm Buffer III（Cat.No.558050）或BD Pharmingen?轉(zhuǎn)錄因子緩沖液套裝（貨號。編號 562574/562725）。Fixable Viability Stain 620 已在小鼠身上進(jìn)行了測試（數(shù)據(jù)未顯示）。
制備
將FVS620染料粉末和230μl新鮮細(xì)胞培養(yǎng)級二甲基亞砜（DMSO;例如，Sigma D2650）置于室溫。加入230μlDMSO并渦旋溶液。檢查溶液并重復(fù)渦旋，直到儲備染料完全溶解。這是庫存解決方案。
存儲
到達(dá)后，將干燥并避光的干燥染料存放在 -80°C 直至使用。用DMSO復(fù)溶后，將儲備溶液以小等分試樣儲存在-20°C下。儲存 90 天后不要使用復(fù)溶染料。請?jiān)谟肈MSO復(fù)溶后90天后丟棄染料溶液。
流式細(xì)胞術(shù)要求
可以使用配備黃綠色或藍(lán)色激光的流式細(xì)胞儀（例如，BD FACSCanto? II、BD LSRFortessa?、BD LSR? II或BD Accuri? C6）。該染料可以從BD Horizon? PE-CF594（例如，610/20-nm濾光片）或PerCP-Cy?5.5（例如，695/40-nm濾光片）的濾光片中讀取。熒光補(bǔ)償最好使用目標(biāo)細(xì)胞的染色和未染色樣品來實(shí)現(xiàn)。
制備
將FVS620染料粉末和230μl新鮮細(xì)胞培養(yǎng)級二甲基亞砜（DMSO;例如，Sigma D2650）置于室溫。加入230μlDMSO并渦旋溶液。檢查溶液并重復(fù)渦旋，直到儲備染料完全溶解。這是庫存解決方案。
存儲
到達(dá)后，將干燥并避光的干燥染料存放在 -80°C 直至使用。用DMSO復(fù)溶后，將儲備溶液以小等分試樣儲存在-20°C下。儲存 90 天后不要使用復(fù)溶染料。請?jiān)谟肈MSO復(fù)溶后90天后丟棄染料溶液。
流式細(xì)胞術(shù)要求
可以使用配備黃綠色或藍(lán)色激光的流式細(xì)胞儀（例如，BD FACSCanto? II、BD LSRFortessa?、BD LSR? II或BD Accuri? C6）。該染料可以從BD Horizon? PE-CF594（例如，610/20-nm濾光片）或PerCP-Cy?5.5（例如，695/40-nm濾光片）的濾光片中讀取。熒光補(bǔ)償最好使用目標(biāo)細(xì)胞的染色和未染色樣品來實(shí)現(xiàn)。
