準備和存儲
避免產(chǎn)品多次凍融。產(chǎn)品應在 -20°C 下未稀釋保存以長期儲存，也可在 4°C 下未稀釋保存以短期儲存。
推薦的實驗流程
對活細胞進行染色，以便通過流式細胞術進行活力分析
1. 獲得單細胞懸液。
2. 在 BD Pharmingen? 染色緩沖液 （FBS） 中重懸細胞（貨號.編號 554656） 或 1× 含有 0.05-0.2 μg/mL DAPI 的 Dulbecco 磷酸鹽緩沖鹽水 （DPBS）。
a. 用于活力分析的 DAPI 的最佳濃度可能因細胞類型而異。我們建議在早期實驗中針對您感興趣的細胞類型滴定試劑。
b. 此外，凋亡細胞可以用不同量的 DAPI 染色。我們建議使用 BD Pharmingen? FITC Annexin V（貨號否 556419） 如果需要進一步分析凋亡細胞。
3. 在室溫下孵育 5 分鐘。分析前無需清洗。
4. 繼續(xù)通過流式細胞術進行分析。
通過流式細胞術對固定細胞進行染色以進行 DNA 含量分析
1. 獲得單細胞懸液。
2. 用 70-80% 冰冷的乙醇在冰上處理細胞 30 分鐘。
a. 乙醇固定通常提供最分辨的直方圖。然而，該試劑也已成功用于 Transcription Factor Buffer Set（貨號.編號 562574/ 562725） 或 BD Cytofix? 固定緩沖液（貨號編號 554655） 和 BD Phosflow? Perm 緩沖液 III（貨號No. 558050） 協(xié)議。
3. 用 BD Pharmingen? 染色緩沖液 （FBS） 洗滌細胞一次。
4. 使用前，立即在染色緩沖液 （FBS） 或 1× DPBS 中將 DAPI 溶液稀釋至 0.5-1 μg/mL。
5. 以 1 - 2 x 10^6 個細胞/mL 的細胞密度對細胞進行 5-15 分鐘的染色。分析前無需進一步清洗。
a. 用于 DNA 含量分析的最佳細胞密度和 DAPI 濃度可能因細胞類型而異。應在早期實驗中優(yōu)化檢測條件以獲得最佳結果。
6. 繼續(xù)通過流式細胞術進行分析。
用于細胞核可視化的固定細胞的免疫熒光染色
1. 根據(jù)需要固定和透化細胞。
2. 使用前立即在 1× DPBS 中將 DAPI 溶液稀釋至 1 μg/ml。
3. 在分析前至少 15 分鐘向每個樣品中添加 DAPI 溶液。
4. 進行成像。
避免產(chǎn)品多次凍融。產(chǎn)品應在 -20°C 下未稀釋保存以長期儲存，也可在 4°C 下未稀釋保存以短期儲存。
推薦的實驗流程
對活細胞進行染色，以便通過流式細胞術進行活力分析
1. 獲得單細胞懸液。
2. 在 BD Pharmingen? 染色緩沖液 （FBS） 中重懸細胞（貨號.編號 554656） 或 1× 含有 0.05-0.2 μg/mL DAPI 的 Dulbecco 磷酸鹽緩沖鹽水 （DPBS）。
a. 用于活力分析的 DAPI 的最佳濃度可能因細胞類型而異。我們建議在早期實驗中針對您感興趣的細胞類型滴定試劑。
b. 此外，凋亡細胞可以用不同量的 DAPI 染色。我們建議使用 BD Pharmingen? FITC Annexin V（貨號否 556419） 如果需要進一步分析凋亡細胞。
3. 在室溫下孵育 5 分鐘。分析前無需清洗。
4. 繼續(xù)通過流式細胞術進行分析。
通過流式細胞術對固定細胞進行染色以進行 DNA 含量分析
1. 獲得單細胞懸液。
2. 用 70-80% 冰冷的乙醇在冰上處理細胞 30 分鐘。
a. 乙醇固定通常提供最分辨的直方圖。然而，該試劑也已成功用于 Transcription Factor Buffer Set（貨號.編號 562574/ 562725） 或 BD Cytofix? 固定緩沖液（貨號編號 554655） 和 BD Phosflow? Perm 緩沖液 III（貨號No. 558050） 協(xié)議。
3. 用 BD Pharmingen? 染色緩沖液 （FBS） 洗滌細胞一次。
4. 使用前，立即在染色緩沖液 （FBS） 或 1× DPBS 中將 DAPI 溶液稀釋至 0.5-1 μg/mL。
5. 以 1 - 2 x 10^6 個細胞/mL 的細胞密度對細胞進行 5-15 分鐘的染色。分析前無需進一步清洗。
a. 用于 DNA 含量分析的最佳細胞密度和 DAPI 濃度可能因細胞類型而異。應在早期實驗中優(yōu)化檢測條件以獲得最佳結果。
6. 繼續(xù)通過流式細胞術進行分析。
用于細胞核可視化的固定細胞的免疫熒光染色
1. 根據(jù)需要固定和透化細胞。
2. 使用前立即在 1× DPBS 中將 DAPI 溶液稀釋至 1 μg/ml。
3. 在分析前至少 15 分鐘向每個樣品中添加 DAPI 溶液。
4. 進行成像。
