產(chǎn)品說明：
FastStart Essential DNA Green Master是一種現(xiàn)成的反應(yīng)混合物，使用LightCycler?Nano和LightCycleer?96儀器上的SYBR Green I檢測格式。用于8管條或單管中的熱啟動PCR。熱啟動PCR通過*小化反應(yīng)開始時非特異性擴增產(chǎn)物的形成，顯zhu提高了PCR的特異性和min感性。
應(yīng)用
FastStart Essential DNA Green Master提供試劑，包括SYBR Green I染料，用于使用LightCycler?96儀器和LightCycleer?Nano儀器擴增和檢測DNA。該試劑盒非常適合用于基因檢測和定量的熱啟動PCR分析。
PCR產(chǎn)物的產(chǎn)生可以通過SYBR Green I熒光信號的測量來檢測。SYBR Green I染料插入DNA螺旋（Zipper，H.等人，2004）。在溶液中，未結(jié)合的染料顯示很少的熒光；然而，熒光（波長，530nm）在DNA結(jié)合時大大增強。因此，在PCR期間，SYBR Green I熒光的增加與產(chǎn)生的雙鏈DNA的量成正比。由于SYBR Green I染料非常穩(wěn)定（在30個擴增周期中僅損失6%的活性），并且LightCycler?96儀器的光學(xué)系統(tǒng)與激發(fā)和發(fā)射波長相匹配，因此它是測量總DNA時的首選試劑。
在LightCycler?96系統(tǒng)上實時PCR期間，SYBR Green I檢測DNA的基本步驟如下：
在擴增開始時，反應(yīng)混合物包含變性DNA、引物和染料。未結(jié)合的染料分子微弱地發(fā)出熒光，產(chǎn)生*小的背景熒光信號，該信號在計算機分析期間被減去。
引物退火后，少數(shù)染料分子可以與雙鏈結(jié)合。DNA結(jié)合導(dǎo)致SYBR Green I分子在激發(fā)時發(fā)光的顯著增加。
在伸長過程中，越來越多的染料分子與新合成的DNA結(jié)合。如果連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)，則實時觀察熒光的增加。在下一個加熱周期DNA變性后，染料分子被釋放，熒光信號下降。
在每個PCR周期的延伸步驟結(jié)束時進行熒光測量，以監(jiān)測擴增DNA的增加量。
為了證明只擴增了所需的PCR產(chǎn)物，您可以在PCR后進行熔化曲線分析。在熔化曲線分析中，反應(yīng)混合物緩慢加熱至95°C，這導(dǎo)致雙鏈DNA熔化，SYBR Green I熒光相應(yīng)降低。儀器持續(xù)監(jiān)測這種熒光降低，并將其顯示為熔化峰。每個熔化峰代表特定DNA產(chǎn)物的特征熔化溫度（Tm）（其中DNA為50%雙鏈和50%單鏈）。決定dsDNA Tm的*重要因素是該片段的長度和GC含量。如果PCR僅產(chǎn)生一個擴增子，熔化曲線分析將僅顯示一個熔化峰。如果存在引物二聚體或其他非特異性產(chǎn)物，它們將顯示為額外的熔化峰。因此，檢查PCR產(chǎn)物的Tm可以與在凝膠電泳中通過長度分析PCR產(chǎn)物進行比較。
此產(chǎn)品的工作原理
FastStart Essential DNA Green Master是一種即用即用的反應(yīng)混合物，專門設(shè)計用于在LightCycler?480 Multiwell Plates 96中應(yīng)用SYBR Green I檢測格式，或在LightCycler?96儀器上應(yīng)用LightCycler?8-管條（白色）。用于執(zhí)行熱啟動PCR。熱啟動PCR已被證明通過*小化反應(yīng)開始時非特異性擴增產(chǎn)物的形成，顯著提*了PCR的特異性和min感性（Chou，Q.等人，1992，Kellogg，D.E.等人，1994，Birch，D.E.，1996）。FastStart Taq DNA聚合酶是一種化學(xué)修飾形式的耐熱重組Taq DNA多聚酶，在75°C以下無活性。這種酶只有在高溫下才有活性，此時引物不再非特異性結(jié)合。在循環(huán)開始之前，酶在單個預(yù)培養(yǎng)步驟（95°C，5至10分鐘）中被完全激活（通過去除阻斷基團）。激活不需要其他熱啟動技術(shù)典型的額外處理步驟。
FastStart Essential DNA Green Master是一種現(xiàn)成的反應(yīng)混合物，使用LightCycler?Nano和LightCycleer?96儀器上的SYBR Green I檢測格式。用于8管條或單管中的熱啟動PCR。熱啟動PCR通過*小化反應(yīng)開始時非特異性擴增產(chǎn)物的形成，顯zhu提高了PCR的特異性和min感性。
應(yīng)用
FastStart Essential DNA Green Master提供試劑，包括SYBR Green I染料，用于使用LightCycler?96儀器和LightCycleer?Nano儀器擴增和檢測DNA。該試劑盒非常適合用于基因檢測和定量的熱啟動PCR分析。
PCR產(chǎn)物的產(chǎn)生可以通過SYBR Green I熒光信號的測量來檢測。SYBR Green I染料插入DNA螺旋（Zipper，H.等人，2004）。在溶液中，未結(jié)合的染料顯示很少的熒光；然而，熒光（波長，530nm）在DNA結(jié)合時大大增強。因此，在PCR期間，SYBR Green I熒光的增加與產(chǎn)生的雙鏈DNA的量成正比。由于SYBR Green I染料非常穩(wěn)定（在30個擴增周期中僅損失6%的活性），并且LightCycler?96儀器的光學(xué)系統(tǒng)與激發(fā)和發(fā)射波長相匹配，因此它是測量總DNA時的首選試劑。
在LightCycler?96系統(tǒng)上實時PCR期間，SYBR Green I檢測DNA的基本步驟如下：
在擴增開始時，反應(yīng)混合物包含變性DNA、引物和染料。未結(jié)合的染料分子微弱地發(fā)出熒光，產(chǎn)生*小的背景熒光信號，該信號在計算機分析期間被減去。
引物退火后，少數(shù)染料分子可以與雙鏈結(jié)合。DNA結(jié)合導(dǎo)致SYBR Green I分子在激發(fā)時發(fā)光的顯著增加。
在伸長過程中，越來越多的染料分子與新合成的DNA結(jié)合。如果連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)，則實時觀察熒光的增加。在下一個加熱周期DNA變性后，染料分子被釋放，熒光信號下降。
在每個PCR周期的延伸步驟結(jié)束時進行熒光測量，以監(jiān)測擴增DNA的增加量。
為了證明只擴增了所需的PCR產(chǎn)物，您可以在PCR后進行熔化曲線分析。在熔化曲線分析中，反應(yīng)混合物緩慢加熱至95°C，這導(dǎo)致雙鏈DNA熔化，SYBR Green I熒光相應(yīng)降低。儀器持續(xù)監(jiān)測這種熒光降低，并將其顯示為熔化峰。每個熔化峰代表特定DNA產(chǎn)物的特征熔化溫度（Tm）（其中DNA為50%雙鏈和50%單鏈）。決定dsDNA Tm的*重要因素是該片段的長度和GC含量。如果PCR僅產(chǎn)生一個擴增子，熔化曲線分析將僅顯示一個熔化峰。如果存在引物二聚體或其他非特異性產(chǎn)物，它們將顯示為額外的熔化峰。因此，檢查PCR產(chǎn)物的Tm可以與在凝膠電泳中通過長度分析PCR產(chǎn)物進行比較。
此產(chǎn)品的工作原理
FastStart Essential DNA Green Master是一種即用即用的反應(yīng)混合物，專門設(shè)計用于在LightCycler?480 Multiwell Plates 96中應(yīng)用SYBR Green I檢測格式，或在LightCycler?96儀器上應(yīng)用LightCycler?8-管條（白色）。用于執(zhí)行熱啟動PCR。熱啟動PCR已被證明通過*小化反應(yīng)開始時非特異性擴增產(chǎn)物的形成，顯著提*了PCR的特異性和min感性（Chou，Q.等人，1992，Kellogg，D.E.等人，1994，Birch，D.E.，1996）。FastStart Taq DNA聚合酶是一種化學(xué)修飾形式的耐熱重組Taq DNA多聚酶，在75°C以下無活性。這種酶只有在高溫下才有活性，此時引物不再非特異性結(jié)合。在循環(huán)開始之前，酶在單個預(yù)培養(yǎng)步驟（95°C，5至10分鐘）中被完全激活（通過去除阻斷基團）。激活不需要其他熱啟動技術(shù)典型的額外處理步驟。