維生素 B6（Vitamin B6，VB6）試劑盒說(shuō)明書
微量法 100T/96S
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
維生素B6（Vitamin B6）又稱吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在體內(nèi)以磷酸酯的形式存在，是一種水溶性維生素，在細(xì)胞中參與多種蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝，對(duì)生物體具有極其重要的作用。
測(cè)定原理：
VB6 與 4-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物，在390nm有特征吸收峰。
組成：
自備儀器和用品：
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。
樣本處理：
1.組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約 0.1g，加入 0.6ml提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4ml，混勻后于 25℃，
16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘）。
2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入0.6ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間 3min）；加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定。
3.血清：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
計(jì)算公式：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.3635x+0.0205，R2 = 0.9986
1.按照蛋白含量計(jì)算
VB6 含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反總÷（V 樣×Cpr）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB6 含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB6 含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4.按照液體體積計(jì)算
VB6 含量（μg/ml）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反總÷V 樣
= 13.76×（△A - 0.0205）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；：V 樣：加入樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1818x+0.0205，R2 = 0.9986
1.按照蛋白含量計(jì)算
VB6 含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V 反總÷（V 樣×Cpr）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB6 含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818 ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB6 含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VB6 含量（μg/ml）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V 反總÷V 樣
=27.52×（△A - 0.0205）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；：V 樣：加入樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1.若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過(guò) 1，請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2.蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再測(cè)定，在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3.顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定。
備注：
微量法 100T/96S
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
維生素B6（Vitamin B6）又稱吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在體內(nèi)以磷酸酯的形式存在，是一種水溶性維生素，在細(xì)胞中參與多種蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝，對(duì)生物體具有極其重要的作用。
測(cè)定原理：
VB6 與 4-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物，在390nm有特征吸收峰。
組成：
| 產(chǎn)品名稱 | BZ6004-100T/96S | Storage |
| 提取液：液體 | 70ml | 4℃ |
| 試劑一：液體 | 1ml | 4℃ |
| 試劑二：液體 | 5ml | 4℃ |
| 試劑三：液體 | 8ml | 4℃避光 |
| 試劑四：液體 | 8ml | 4℃避光 |
| 說(shuō)明書 | 一份 | |
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。
樣本處理：
1.組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約 0.1g，加入 0.6ml提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4ml，混勻后于 25℃，
16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘）。
2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入0.6ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間 3min）；加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定。
3.血清：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
| 空白管 | 測(cè)定管 | |
| 樣品（μl） | 40 | |
| 試劑一（μl） | 40 | |
| 試劑二（μl） | 40 | 40 |
| 試劑三（μl） | 60 | 60 |
| 試劑四（μl） | 60 | 60 |
| 充分混勻，25℃反應(yīng) 20min，于微量石英比色皿/96 孔板，測(cè)定 390nm 處吸光 值，記為A 空白管和A 測(cè)定管，△A=A 測(cè)定管-A 空白管?？瞻坠苤灰鲆还堋?/td> | ||
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.3635x+0.0205，R2 = 0.9986
1.按照蛋白含量計(jì)算
VB6 含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反總÷（V 樣×Cpr）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB6 含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB6 含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4.按照液體體積計(jì)算
VB6 含量（μg/ml）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V 反總÷V 樣
= 13.76×（△A - 0.0205）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；：V 樣：加入樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1818x+0.0205，R2 = 0.9986
1.按照蛋白含量計(jì)算
VB6 含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V 反總÷（V 樣×Cpr）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB6 含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818 ×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB6 含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VB6 含量（μg/ml）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V 反總÷V 樣
=27.52×（△A - 0.0205）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；：V 樣：加入樣本體積，0.04ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1.若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過(guò) 1，請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2.蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再測(cè)定，在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3.顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定。
備注：