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AAT Bioquest  YZ-4503 SMCC Plus? *Enhanced water solubility, crosslinking efficiency and stability* 5mg
產(chǎn)品說明：

中國科學院	分子量
92921-24-9	465.37

與SMCC和磺基SMCC相比，SMCC Plus具有更高的水溶性和交聯(lián)效率。
 
示例協(xié)議
 
一目了然
重要說明
儲存在<-15°C很重要，應存放在陰涼，黑暗的地方。
 
自收到之日起12個月內(nèi)即可使用。注意：SMCC Plus? 可溶于水和許多其他水性緩沖液，但穩(wěn)定性低于 DMSO 或 DMF。因此，不建議制作重復使用的緩沖儲備溶液。此外，其溶解度隨著鹽濃度的增加而降低。
 
實驗方案樣本

1. 為含胺蛋白制備偶聯(lián)緩沖液，蛋白-NH2（緩沖液A）：磷酸鹽緩沖鹽水（PBS，pH 7.2）或其他pH 7.2至8.0的無胺緩沖液可用于此目的。注意：在偶聯(lián)過程中避免使用含有伯胺（例如Tris或甘氨酸）和巰基的緩沖液，因為它們會與預期的反應競爭。如有必要，將樣品透析或脫鹽到適當?shù)木彌_液（如PBS）中。
2. 為含巰基的蛋白質(zhì)Protein-SH（緩沖液B）制備偶聯(lián)緩沖液：pH為6.5-7.5的無巰基緩沖液可用于此目的。注意：在偶聯(lián)過程中避免使用含有巰基的緩沖液，因為它們會與預期的反應競爭。如有必要，將樣品透析或脫鹽到適當?shù)木彌_液（如PBS）中。注意：添加1-5 mM EDTA有助于螯合二價金屬，從而減少含巰基蛋白質(zhì)中的二硫化物形成。
3. 制備脫鹽柱，從過量的交聯(lián)劑和反應副產(chǎn)物中分離出改性蛋白質(zhì)。
4. 制備含胺（蛋白質(zhì)-NH2）和其偶聯(lián)緩沖液A和B中的含巰基蛋白質(zhì)（Protein-SH）溶液。
5. 制備蛋白 #1-SMCC Plus 偶聯(lián)物：將適量的 SMCC Plus?? 加入緩沖液 A 中的蛋白 #1 溶液中。蛋白質(zhì)-NH的濃度2確定所需的 SMCC Plus? 的摩爾比。建議所需的 SMCC Plus? 量如下，但最佳比例必須通過使用目標蛋白通過實驗確定：

• 1 mg/mL <蛋白質(zhì)樣品使用摩爾過量 40-80 倍。
• 1-4 mg/mL 的蛋白質(zhì)樣品使用摩爾過量 20 倍。
• 5-10 mg/mL 的蛋白質(zhì)樣品使用摩爾過量 5 至 10 倍。

6. 將上述反應混合物在室溫下孵育30-60分鐘或在4°C下孵育2-4小時。注意： 為了在完成之前停止偶聯(lián)反應，加入含有還原半胱氨酸的緩沖液，其濃度是蛋白質(zhì)-SH的巰基的幾倍。注意：偶聯(lián)效率可以通過電泳分離和隨后的蛋白質(zhì)染色來估計。
7. 使用與共軛緩沖液A平衡的脫鹽柱去除多余的SMCC Plus?。
8. 混合并混合含巰基（蛋白質(zhì)-SH）和脫鹽含胺的蛋白質(zhì)（蛋白質(zhì)-NH2）-SMCC Plus?偶聯(lián)物的摩爾比對應于最終偶聯(lián)物所需的摩爾比，并且與兩種蛋白質(zhì)上存在的巰基和活化胺的相對數(shù)量一致。注意：與馬來酰亞胺部分反應的分子必須具有游離（還原）巰基。對于蛋白質(zhì)，在室溫下使用 5 mM TCEP 還原二硫鍵 30 分鐘，然后通過合適的脫鹽柱兩次。請注意，蛋白質(zhì)（例如抗體）可能因二硫鍵完全還原而失活。IgG 中鉸鏈區(qū)二硫鍵的選擇性還原可以用 2-巰基乙胺?HCl （2-MEA） 完成?？梢允褂肗-琥珀酰亞胺基S-乙酰硫代乙酸酯（SATA）或2-亞氨基硫醇烷?HCl（特勞特試劑）將巰基添加到分子中，其可修飾伯胺。

 
儲存條件
 
儲存在2°C至8°C。 有效期為自收到之日起一年。
 
注意：SMCC Plus? 對濕氣敏感。商店干燥。打開前將小瓶平衡至室溫，以避免水分凝結(jié)。溶解所需量的試劑，并在水解發(fā)生前立即使用。丟棄任何未使用的復溶試劑。不要將試劑儲存在溶液中。