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產(chǎn)品說明：
       親和素/鏈霉親和素-生物素相互作用是蛋白質(zhì)與其配體之間已知最強(qiáng)的非共價(jià)生物相互作用（Kd = 10-15 M-1）。一種親和素結(jié)合四種生物素。生物素和親和素/鏈霉親和素之間的鍵形成非常迅速，一旦形成，就不受pH值，有機(jī)溶劑和其他變性劑的影響。親和素和鏈霉親和素都具有基本上不可逆的生物素結(jié)合特性，因?yàn)榻Y(jié)合的生物素只能通過使蛋白質(zhì)的亞基變性來釋放。生物素及其衍生物與各種親和素的緊密和特異性結(jié)合已在許多生物學(xué)應(yīng)用中得到了廣泛的探索。Amplite? 比色生物素定量試劑盒提供了一種方便的方法，用于估計(jì)生物素-蛋白質(zhì)偶聯(lián)物中生物素與蛋白質(zhì)的摩爾比或定量溶液中的生物素濃度。該測定采用HABA（4'-羥基偶**-2-羧酸），這是一種與親和素結(jié)合時顯示顯著光譜變化的試劑。生物素很容易從HABA/親和素復(fù)合物中置換HABA，導(dǎo)致500nm處的吸收減少。該試劑盒最適合用于測定2至16μM 范圍內(nèi)的生物素濃度。該測定可以以比色皿或微孔板形式進(jìn)行。
 
組件
組分A：親和素      1瓶
組分B：HABA檢測緩沖液1瓶 （40mL）
組分C：d-生物素1瓶（200μL、100μM）
 
示例協(xié)議
 
一目了然
協(xié)議摘要

1. 制備 HABA/親和素測定混合物（180μL）
2. 添加測試樣品（20μL）
3. 在室溫下孵育5分鐘
4. 監(jiān)視器在500nm處的吸光度下降

 
重要
在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有試劑盒組分解凍至室溫。
 
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
 
親和素儲備液（100X）
添加 400 μL ddH2O放入親和素（組分A）的小瓶中，充分混合。
注意 未使用的100X親和素儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在-20C下儲存。
 
工作溶液的制備
HABA/親和素檢測解決方案
將 200μL 親和素儲備溶液（100X）加入20mL HABA 檢測緩沖液（組分B）中，并充分混合。
注意HABA/親和素測定混合物的未使用部分可能在4°C下儲存長達(dá)一周。
 
實(shí)驗(yàn)方案樣本
注意有必要在幾次稀釋度下測試含生物素的樣品，以確保生物素的濃度在測定線性范圍內(nèi)，即2-16μM的生物素（最終濃度）。
注意 避免使用含鉀的緩沖液，因?yàn)樗鼤?dǎo)致測定中的沉淀。
注意 游離生物素必須通過凝膠過濾或透析與生物素化蛋白分離。

1. 各加入20μL含生物素的樣品，陰性對照（ddH2O或用于溶解含生物素樣品的相同緩沖液），并將陽性對照（組分C）放入表96和表1中所述的2孔透明底部微孔板中。
2. 向含生物素樣品、陰性對照和陽性對照的每個孔中加入 180 μL HABA/親和素測定溶液，使生物素測定總體積為200μL/孔。

注意 對于比色皿形式，將100μL樣品與900μL HABA/親和素測定混合物一起加入。

3. 通過在5-100rpm的搖板器上振蕩，在室溫下孵育反應(yīng)混合物200分鐘，避光并避免在移液過程中產(chǎn)生氣泡。
4. 用吸光度酶標(biāo)儀在500nm處監(jiān)測吸光度下降。