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產(chǎn)品說明：
丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過氧化的天然副產(chǎn)物，被廣泛用作確定氧化應激和自由基形成的關鍵指標。MDA的測量歷來依賴于與硫代巴比妥酸（TBA）的反應，以產(chǎn)生可以通過比色法或熒光法測量的化合物。但該測定不是MDA特有的，也可以在90-100°C的酸性條件下進行。 已經(jīng)有許多商業(yè)ELISA試劑盒，這使得它更加昂貴和乏味。Amplite? 比色丙二醛 （MDA） 定量試劑盒提供了最快速、最方便的 MDA 測量方法，無需 TBAR 加熱步驟。MDA藍色與MDA反應生成藍色?產(chǎn)物，用吸光度酶標儀在695nm處測量。該測定非常快速且對MDA具有特異性，幾乎不受其他醛類的干擾。
 
組件
 
組件 A：MDA 藍色?  1瓶
組分B：稀釋緩沖液     1 瓶 （10 mL）
組件C：MDA標準 1瓶（凍干粉）
組分D：反應溶液  1 瓶 （10 mL）
 
示例協(xié)議
 
一目了然
協(xié)議摘要
 

1. 制備測試樣品以及連續(xù)稀釋的MDA標準品（50 μL）
2. 加入 MDA 藍色?儲備溶液 （10 μL）
3. 在室溫下孵育 10 - 30 分鐘
4. 加入反應溶液 （40 μL）
5. 監(jiān)測 695 nm 處的外徑增加

 
重要說明
在開始實驗之前，請在室溫下解凍所有組分。
 
儲備液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。
1. MDA標準溶液（100 mM）：
加入100 μL ddH2O放入MDA標準小瓶（組分C）中，制成100 mM MDA儲備溶液。
 
標準溶液的制備
MDA標準
 
將 4 μL 100 mM MDA 標準品加入 996 μL 稀釋緩沖液（組分 B）中，得到 400 μM MDA 溶液 （MDA7）。然后在稀釋緩沖液中進行1：2連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的MDA標準品（MDA6 - MDA1）。
 
實驗方案樣本
表 1.MDA標準品和測試樣品在96孔透明底部微孔板中的布局。MDA=MDA標準品（MDA1 - MDA7，6.25至400μM），BL=空白對照，TS=測試樣品。
 
提單     提單     TS  TS
MDA1  MDA1  ...   ...
MDA2  MDA2  ...   ...
MDA3  MDA3       
MDA4  MDA4       
MDA5  MDA5       
MDA6  MDA6       
MDA7  MDA7       
表 2.每個孔的試劑組成。
 
井  卷  試劑
MDA1 - MDA7     50 微升     連續(xù)稀釋（6.25 至 400 μM）
提單     50 微升     稀釋緩沖液（組分B）
TS  50 微升     測試樣品
 

1. 根據(jù)表1和表2中提供的布局制備MDA標準品（MDA），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。

 

2. 將 10 μL MDA 藍?（組分 A）溶液添加到 MDA 標準品、空白對照和測試樣品的每個孔中。對于 384 孔板，在每個孔中使用 5 μL MDA 藍色?溶液。

 

3. 將反應混合物在室溫下孵育10-30分鐘。

 

4. 加入 40 μL 反應溶液（組分 D），使總測定體積為 100 μL/孔。對于 384 孔板，使用 20 μL 反應溶液，總測定體積為 50 μL/孔。

 

5. 將最終反應混合物在室溫下孵育30-60分鐘。

 

6. 使用吸光度讀數(shù)儀監(jiān)測吸光度增加，在OD為695~700nm處進行路徑檢查校正。