產(chǎn)品說明：
煙xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和煙xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的兩種重要的輔助因子。NADH是NAD +的還原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通過酯鍵將磷酸基團(tuán)添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代謝生物反應(yīng)，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作為還原劑。傳統(tǒng)的NAD / NADH和NADP / NADPH測(cè)定是通過監(jiān)測(cè)340nm處的NADH或NADPH吸收來完成的。該方法靈敏度低，干擾高，因?yàn)闇y(cè)定是在需要昂貴的石英微孔板的紫外范圍內(nèi)進(jìn)行的。我們的 Amplite? NAD/NADH 比率檢測(cè)試劑盒為靈敏檢測(cè) NAD、NADH 及其比率提供了一種方便的方法。NADH探針是一種顯色傳感器，在NADH還原時(shí)在~460nm處具有最大吸光度。~460nm處的吸光度增加與溶液中NADH的濃度成正比。NADH探針可以在無酶反應(yīng)中識(shí)別NADH，并且吸光度酶標(biāo)儀可以在~460nm處輕松讀取信號(hào)。Amplite? 比色 NADH 檢測(cè)試劑盒提供靈敏的檢測(cè)方法，可在 3 μL 檢測(cè)體積中檢測(cè)低至 100 μM NADH。該測(cè)定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式進(jìn)行。
平臺(tái)
吸光度酶標(biāo)儀
吸光度 460 納米
推薦板 清除底部
組件
組分A：NAD/NADH回收酶混合物 2瓶（凍干粉）
組件 B-I：NADH 探頭 1 瓶 （4 mL）
組件 B-II：NADH 探針緩沖液 1 瓶 （16 mL）
組件C：NADH標(biāo)準(zhǔn)（FW：709） 1 瓶 （142 μg）
組分D：NAD提取溶液 1 瓶 （10 mL）
組分E：中和溶液 1 瓶 （10 mL）
組件F：提取控制解決方案 1 瓶 （10 mL）
組分G：裂解緩沖液 1 瓶 （10 mL）
一目了然
協(xié)議摘要
強(qiáng)烈建議在37°C下用裂解緩沖液（組分G）孵育細(xì)胞，并使用上清液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每種試劑盒組分之一。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)
NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （1 mM）
將 200 μL 1X PBS 緩沖液加入 NADH 標(biāo)準(zhǔn)品（組分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
NADH標(biāo)準(zhǔn)
將 50 μL 1 mM （1 nmol/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入 450 μL 1X PBS 緩沖液 （pH 7.4） 中，生成 100 μM （100 pmols/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后取100μM NADH標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1X PBS緩沖液中進(jìn)行2：1連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的NADH標(biāo)準(zhǔn)品（NS1 - NS7）。注意：稀釋的NADH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。
工作溶液的制備
將 8 mL NADH 探針緩沖液（組分 B-II）加入 NAD/NADH 回收酶混合物（組分 A）瓶中，并充分混合。
將 2 mL NADH 探針（組分 B-I）加入組件 A+B-II 的瓶中，充分混合制成 NAD/NADH 工作溶液。
注意 這種NAD / NADH工作溶液足以進(jìn)行125-200次測(cè)定。工作溶液不穩(wěn)定，及時(shí)使用，避免直接暴露在光線下。
注意 可以嘗試使用ddH 2 O（例如500 uL）溶解組分A，然后按比例與B-II和B-I混合，以使NAD / NADH工作溶液僅供充分使用。
煙xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和煙xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的兩種重要的輔助因子。NADH是NAD +的還原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通過酯鍵將磷酸基團(tuán)添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代謝生物反應(yīng)，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作為還原劑。傳統(tǒng)的NAD / NADH和NADP / NADPH測(cè)定是通過監(jiān)測(cè)340nm處的NADH或NADPH吸收來完成的。該方法靈敏度低，干擾高，因?yàn)闇y(cè)定是在需要昂貴的石英微孔板的紫外范圍內(nèi)進(jìn)行的。我們的 Amplite? NAD/NADH 比率檢測(cè)試劑盒為靈敏檢測(cè) NAD、NADH 及其比率提供了一種方便的方法。NADH探針是一種顯色傳感器，在NADH還原時(shí)在~460nm處具有最大吸光度。~460nm處的吸光度增加與溶液中NADH的濃度成正比。NADH探針可以在無酶反應(yīng)中識(shí)別NADH，并且吸光度酶標(biāo)儀可以在~460nm處輕松讀取信號(hào)。Amplite? 比色 NADH 檢測(cè)試劑盒提供靈敏的檢測(cè)方法，可在 3 μL 檢測(cè)體積中檢測(cè)低至 100 μM NADH。該測(cè)定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式進(jìn)行。
平臺(tái)
吸光度酶標(biāo)儀
吸光度 460 納米
推薦板 清除底部
組件
組分A：NAD/NADH回收酶混合物 2瓶（凍干粉）
組件 B-I：NADH 探頭 1 瓶 （4 mL）
組件 B-II：NADH 探針緩沖液 1 瓶 （16 mL）
組件C：NADH標(biāo)準(zhǔn)（FW：709） 1 瓶 （142 μg）
組分D：NAD提取溶液 1 瓶 （10 mL）
組分E：中和溶液 1 瓶 （10 mL）
組件F：提取控制解決方案 1 瓶 （10 mL）
組分G：裂解緩沖液 1 瓶 （10 mL）
一目了然
協(xié)議摘要
- 準(zhǔn)備 25 μL NADH 標(biāo)準(zhǔn)品和/或測(cè)試樣品
- 加入 25 μL NAD 提取溶液
- 37歲孵化oC 15 分鐘
- 加入 25 μL 中和溶液
- 加入 75 μL NAD/NADH 工作溶液
- 在室溫下孵育 15 分鐘至 2 小時(shí)
- 監(jiān)測(cè) 460 nm 處的吸光度
強(qiáng)烈建議在37°C下用裂解緩沖液（組分G）孵育細(xì)胞，并使用上清液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每種試劑盒組分之一。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)
NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （1 mM）
將 200 μL 1X PBS 緩沖液加入 NADH 標(biāo)準(zhǔn)品（組分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
NADH標(biāo)準(zhǔn)
將 50 μL 1 mM （1 nmol/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入 450 μL 1X PBS 緩沖液 （pH 7.4） 中，生成 100 μM （100 pmols/μL） NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后取100μM NADH標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1X PBS緩沖液中進(jìn)行2：1連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的NADH標(biāo)準(zhǔn)品（NS1 - NS7）。注意：稀釋的NADH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。
工作溶液的制備
將 8 mL NADH 探針緩沖液（組分 B-II）加入 NAD/NADH 回收酶混合物（組分 A）瓶中，并充分混合。
將 2 mL NADH 探針（組分 B-I）加入組件 A+B-II 的瓶中，充分混合制成 NAD/NADH 工作溶液。
注意 這種NAD / NADH工作溶液足以進(jìn)行125-200次測(cè)定。工作溶液不穩(wěn)定，及時(shí)使用，避免直接暴露在光線下。
注意 可以嘗試使用ddH 2 O（例如500 uL）溶解組分A，然后按比例與B-II和B-I混合，以使NAD / NADH工作溶液僅供充分使用。