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產(chǎn)品說明：
煙xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是活細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的許多酶反應(yīng)的兩個重要輔助因子。NAD通過酯鍵將磷酸基團(tuán)添加到腺苷核苷酸的2'位置，形成NADP。NADP用于合成代謝生物反應(yīng)，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作為還原劑。在葉綠體中，NADP是一種氧化劑，在光合作用的初步反應(yīng)中很重要。光合作用產(chǎn)生的NADPH被用作光合作用加爾文循環(huán)中生物合成反應(yīng)的還原能力。量化這些因素的產(chǎn)生或消耗是監(jiān)測酶介導(dǎo)反應(yīng)或篩選這些酶反應(yīng)的調(diào)節(jié)劑或底物的重要方法。市場上有幾種試劑盒可以量化NADPH或NADP / NADPH總量，但是迄今為止，在存在大量過量NADPH的情況下檢測NADP生成一直非常具有挑戰(zhàn)性，因為NADP的吸收峰在260nm處并且不發(fā)出熒光，這使得測量不切實際。Amplite?熒光NADP檢測試劑盒可靈敏快速地檢測NADP。該試劑盒使用我們新開發(fā)的NADP傳感器Quest Fluor? NADP試劑直接測量NADP。該試劑盒中使用的專有探針僅與NADP反應(yīng)，以產(chǎn)生在特定激發(fā)和發(fā)射光譜范圍內(nèi)發(fā)出熒光的產(chǎn)物，并且對NADPH幾乎沒有反應(yīng)。該試劑盒可在 30 μL 測定體積中檢測低至 100 nM NADP，并在存在過量 NADPH 的情況下監(jiān)測 0.3% NADP 生成。該測定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式進(jìn)行，可用于高通量篩選。
平臺
熒光酶標(biāo)儀
Excitation：420 納米
Emission：480 納米
Cutoff：455 納米
推薦板：純黑色
組件
組件A：Quest Fluor? NADP Probe  1 瓶 （5 mL）
組分B：檢測溶液       1 瓶 （5 mL）
組分C：增強(qiáng)劑溶液    1 瓶 （3.5 毫升）
組件D：NADP標(biāo)準(zhǔn)    1 瓶 （389 μg）

1. 制備 NADP 標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品 （50 μL）
2. 添加 20 μL Quest 福陸? NADP 探針
3. 加入 20 μL 檢測液
4. 在室溫下孵育 10 - 20 分鐘
5. 添加 15 μL 增強(qiáng)劑溶液
6. 在室溫下孵育 10 - 20 分鐘
7. 監(jiān)測 420/480 nm 處的熒光（截止值 = 455 nm）

重要說明：在開始實驗之前，在室溫下解凍每個試劑盒組件。
儲備液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. NADP 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （1 mM）：
加入 500 μL ddH2O放入NADP標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中，制成1mM NADP標(biāo)準(zhǔn)溶液。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
NADP 標(biāo)準(zhǔn)
將 10 μL 1mM NADP 標(biāo)準(zhǔn)溶液加入 990 μL H 中2O 或 1X PBS 緩沖液以生成 10 μM NADP 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （NS7）。取 10 μM NADP 標(biāo)準(zhǔn)溶液 （NS7），在 H 中進(jìn)行 1：3 連續(xù)稀釋2O 或 1X PBS 緩沖液以獲得連續(xù)稀釋的 NADP 標(biāo)準(zhǔn)品 （NS6 - NS1）。注意：稀釋的NADP標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時內(nèi)使用。
實驗方案樣本
表 1.NADP標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品在黑色/實心底部96孔微孔板中的布局。NS=NADP標(biāo)準(zhǔn)品（NS1-NS7，0.01至10μM）;BL = 空白控件;TS=測試樣品。

1. 根據(jù)表1和表2中提供的布局制備NADP標(biāo)準(zhǔn)品（NS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于 384 孔板，每孔使用 25 μL 試劑而不是 50 μL。
2. 將 20 μL Quest Fluor? NADP Probe（組分 A）溶液加入 NADP 標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照和測試樣品的每個孔中，充分混合。對于 384 孔板，改用 10 μL Quest Fluor? Probe（組分 A）溶液。
3. 向每個孔中加入 20 μL 測定溶液（組分 B），充分混合。對于 384 孔板，改用 10 μL 檢測溶液（組分 B）。
4. 將反應(yīng)在室溫下孵育10-20分鐘，避光。
5. 向每個孔中加入 15 μL 增強(qiáng)劑（組分 C），使 NADP 測定總體積為 105 μL/孔。對于 384 孔板，改為添加 7.5 uL 增強(qiáng)劑（組分 C），總體積為 52.5 μL/孔。
6. 在室溫下孵育 10 - 20 分鐘，避光。
7. 用熒光酶標(biāo)儀在420/480nm處監(jiān)測熒光增加（截止= 455nm）。