產(chǎn)品說明:
細(xì)胞內(nèi)二氫煙xian胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的檢測對于疾病診斷和藥物發(fā)現(xiàn)具有重要意義。一般來說,氧化還原偶聯(lián)NAD/NADH和NADP/NADPH在能量代謝、糖酵解、三羧酸循環(huán)和線粒體呼吸中起著關(guān)鍵作用。細(xì)胞中NAD(P)H水平的增加與活性氧(ROS)的異常產(chǎn)生和DNA損傷有關(guān)。然而,由于缺乏靈敏的NAD(P)H探針,在生物系統(tǒng)中檢測細(xì)胞內(nèi)NAD(P)H一直具有挑戰(zhàn)性。細(xì)胞計?細(xì)胞內(nèi)NADH/NADPH流式細(xì)胞術(shù)分析試劑盒提供了一種監(jiān)測活細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)NAD(P)H水平的有效方法。JZL1707 NAD(P)H傳感器已被開發(fā)為一種出色的熒光探針,用于檢測和成像細(xì)胞中的NADH / NADPH。探針結(jié)合NADH / NADPH以產(chǎn)生具有高靈敏度和特異性的強熒光信號。JZL1707 NAD(P)H傳感器可以很容易地加載到活細(xì)胞中,并且可以使用PE通道中的流式細(xì)胞儀方便地監(jiān)測其熒光信號。
平臺
流式細(xì)胞儀
Excitation:488 nm 激光
Emission:575/26 nm 濾光片
儀器規(guī)格:聚**通道
組件
組件A: JZL1707 NAD(P)H 傳感器 1 瓶 (100 uL)
組分B:檢測緩沖液 1 瓶 (50 mL)
實驗方案樣本
細(xì)胞內(nèi)二氫煙xian胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的檢測對于疾病診斷和藥物發(fā)現(xiàn)具有重要意義。一般來說,氧化還原偶聯(lián)NAD/NADH和NADP/NADPH在能量代謝、糖酵解、三羧酸循環(huán)和線粒體呼吸中起著關(guān)鍵作用。細(xì)胞中NAD(P)H水平的增加與活性氧(ROS)的異常產(chǎn)生和DNA損傷有關(guān)。然而,由于缺乏靈敏的NAD(P)H探針,在生物系統(tǒng)中檢測細(xì)胞內(nèi)NAD(P)H一直具有挑戰(zhàn)性。細(xì)胞計?細(xì)胞內(nèi)NADH/NADPH流式細(xì)胞術(shù)分析試劑盒提供了一種監(jiān)測活細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)NAD(P)H水平的有效方法。JZL1707 NAD(P)H傳感器已被開發(fā)為一種出色的熒光探針,用于檢測和成像細(xì)胞中的NADH / NADPH。探針結(jié)合NADH / NADPH以產(chǎn)生具有高靈敏度和特異性的強熒光信號。JZL1707 NAD(P)H傳感器可以很容易地加載到活細(xì)胞中,并且可以使用PE通道中的流式細(xì)胞儀方便地監(jiān)測其熒光信號。
平臺
流式細(xì)胞儀
Excitation:488 nm 激光
Emission:575/26 nm 濾光片
儀器規(guī)格:聚**通道
組件
組件A: JZL1707 NAD(P)H 傳感器 1 瓶 (100 uL)
組分B:檢測緩沖液 1 瓶 (50 mL)
- 準(zhǔn)備細(xì)胞 (0.5 - 1×106細(xì)胞/毫升)
- 用測試化合物和JZL1707 NAD(P)H傳感器在37oC下孵育細(xì)胞30-60分鐘
- 洗滌并將細(xì)胞保存在檢測緩沖液中
- 使用PE通道使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞
實驗方案樣本
- 對于每個樣品,在您選擇的 0.5 mL 無血清培養(yǎng)基或緩沖液中制備細(xì)胞,密度為 1×105至 1×106細(xì)胞/毫升。注意:應(yīng)單獨評估每個細(xì)胞系,以確定最佳細(xì)胞密度。對于貼壁細(xì)胞,用0.5mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整,并用無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。注意:JZL1707 NAD(P)H傳感器對血清敏感,因此建議將細(xì)胞保存在您選擇的無血清培養(yǎng)基或緩沖液中?;蛘?,可以在常規(guī)全培養(yǎng)基中制備和處理細(xì)胞。使用JZL1707 NAD(P)H傳感器孵育時,更換為您選擇的無血清培養(yǎng)基或緩沖液。
- 將細(xì)胞與測試化合物在 37 oC 下孵育所需的時間,以刺激細(xì)胞內(nèi) NADH/NADPH。注意:適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所使用的單個細(xì)胞類型和測試化合物。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
- 將 1 μL JZL1707 NAD(P)H 傳感器(組分 A)加入 0.5 mL 細(xì)胞懸液中。在 37 oC 下孵育 30-60 分鐘。注意:對于NADH / NADPH陽性對照處理:將Jurkat細(xì)胞與100μM NADH或NADPH在無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘,并與JZL1707 NAD(P)H傳感器工作溶液在37oC下再孵育30分鐘。
- 用所需的緩沖液洗滌細(xì)胞一次。將細(xì)胞保存在檢測緩沖液(組分B)中。
- 使用流式細(xì)胞儀監(jiān)測PE通道處的熒光強度。對感興趣的細(xì)胞進行門控,不包括碎片。



