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產(chǎn)品說明：
細胞內(nèi)二氫煙xian胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的檢測對于疾病診斷和藥物發(fā)現(xiàn)具有重要意義。一般來說，氧化還原偶聯(lián)NAD/NADH和NADP/NADPH在能量代謝、糖酵解、三羧酸循環(huán)和線粒體呼吸中起著關(guān)鍵作用。細胞中NAD（P）H水平的增加與活性氧（ROS）的異常產(chǎn)生和DNA損傷有關(guān)。然而，由于缺乏靈敏的NAD（P）H探針，在生物系統(tǒng)中檢測細胞內(nèi)NAD（P）H一直具有挑戰(zhàn)性。細胞計?細胞內(nèi)NADH/NADPH流式細胞術(shù)分析試劑盒提供了一種有效的方法來監(jiān)測遠譜活細胞中的細胞內(nèi)NAD（P）H水平，并且可以與其他應(yīng)用（如GFP表達的細胞或MitoTracker的應(yīng)用）結(jié)合使用。JJ1902 NAD（P）H傳感器已被開發(fā)為一種出色的熒光探針，用于檢測和成像細胞中的NADH / NADPH。該探針本質(zhì)上是熒光探針，結(jié)合NADH / NADPH以產(chǎn)生具有高靈敏度和特異性的強熒光信號。JJ1902 NAD（P）H傳感器可以很容易地加載到活細胞中，并且可以使用APC通道中的流式細胞儀方便地監(jiān)測其熒光信號。
平臺
流式細胞儀
Excitation：640 nm 激光
Emission：660/20 nm 濾光片
儀器規(guī)格：APC 渠道
組件
組件A： JJ1902 鈉（P）H傳感器      1 瓶 （100 μL）
組分B：檢測緩沖液    1 瓶 （50 mL）

1. 準備細胞 （0.5 - 1×106細胞/毫升）
2. 用測試化合物和JJ1902 NAD（P）H傳感器在37時孵育細胞oC 20-30 分鐘
3. 洗滌并將細胞保存在檢測緩沖液中
4. 使用APC通道使用流式細胞儀分析細胞

重要事項：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。
實驗方案樣本

1. 對于每個樣品，在您選擇的 0.5 mL 無血清培養(yǎng)基或緩沖液中制備細胞，密度為 1×105至 1×106細胞/毫升。注意：應(yīng)單獨評估每個細胞系，以確定最佳細胞密度。對于貼壁細胞，用0.5mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并用無血清培養(yǎng)基洗滌細胞一次。注意：JJ1902 NAD（P）H傳感器在血清存在下也兼容。傳感器條件的優(yōu)化是強烈建議細胞系到細胞系。                                                                                                                                                                             
2. 將細胞與測試化合物一起孵育在37oC在所需的時間內(nèi)刺激細胞內(nèi)NADH / NADPH。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所使用的單個細胞類型和測試化合物。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
3. 將 1 μL JJ1902 NAD（P）H 傳感器（組分 A）加入 0.5 mL 細胞懸液中。37歲孵化oC 30-60 分鐘。注意：對于NADH / NADPH陽性對照治療：將Jurkat細胞與100μM NADH或NADPH在無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘，并與JJ1902 NAD（P）H傳感器工作溶液在37oC 再持續(xù) 30 分鐘。
4. 用所需的緩沖液（如HHBS或DPBS）洗滌細胞一次。將細胞保存在檢測緩沖液（組分B）中。

使用流式細胞儀監(jiān)測APC通道處的熒光強度。對感興趣的細胞進行門控，不包括碎片。