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產(chǎn)品說明：

分子量 不適用

激發(fā)（納米） 500

發(fā)射（納米） 582

 
活性氧（ROS）是含有氧的化學(xué)反應(yīng)分子。實(shí)例包括超氧化物、羥基自由基、單線態(tài)氧和過氧化物。由于存在不成對(duì)的價(jià)殼電子，ROS具有高度反應(yīng)性。ROS是氧氣正常代謝的天然副產(chǎn)物，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和體內(nèi)平衡中具有重要作用。然而，在環(huán)境壓力（例如紫外線或熱暴露）期間，ROS水平會(huì)急劇增加。這可能會(huì)對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)造成嚴(yán)重?fù)p害。累積起來，這被稱為氧化應(yīng)激。MitoROS? 580是一種超氧化物敏感染料，在加載到活細(xì)胞中時(shí)定位于線粒體中。MitoROS? 580被超氧化物氧化產(chǎn)生紅色熒光。MitoROS? 580 可用于使用熒光顯微鏡或熒光流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)線粒體中的超氧化物。MitoROS? 580試劑滲透到活細(xì)胞中，選擇性地靶向線粒體。它被超氧化物迅速氧化。它不太可能被其他活性氧（ROS）和活性氮（RNS）氧化。氧化產(chǎn)物在細(xì)胞中具有高熒光。MitoROS? 580為研究各種病理中的氧化應(yīng)激提供了有價(jià)值的工具。
 
示例協(xié)議
 
一目了然
重要說明
此協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。在制作MitoROS? 580工作溶液之前根據(jù)需要處理細(xì)胞。
 
儲(chǔ)備液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
 
1. MitoROS 580 儲(chǔ)備溶液 （1000X）將 13 μL DMSO 加入 MitoROS?? 580 小瓶中并充分混合。
注意：未使用的儲(chǔ)備溶液可以儲(chǔ)存在-20oC.避光。
 
工作溶液的制備
MitoROS? 580工作溶液（2X）：
將DMSO儲(chǔ)備溶液稀釋到具有20 mM Hepes緩沖液（HHBS）的Hanks溶液中，制成2X工作溶液。注意：2X MitoROS? 580工作溶液不穩(wěn)定，請(qǐng)及時(shí)使用。
 
實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 根據(jù)需要處理細(xì)胞。
2. 將細(xì)胞（例如100μL/孔在96孔板中）與等體積的2X MitoROS? 580工作溶液在10°C下孵育30-37分鐘，避光。注意：MitoROS? 580的最終細(xì)胞濃度不應(yīng)超過1 X.濃度超過1 X會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用，包括線粒體形態(tài)改變以及熒光重新分布到細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。注意：不同的細(xì)胞對(duì)MitoROS? 580的反應(yīng)不同，相應(yīng)地調(diào)整工作濃度。
3. 輕輕洗滌細(xì)胞三次，然后用HHBS緩沖液代替。
4. 使用適當(dāng)?shù)臒晒鈨x器（例如熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀）分析細(xì)胞，Ex / Em = 510 / 580 nm。