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產(chǎn)品說明：

激發(fā)（納米） 576

發(fā)射（納米） 598

 
細(xì)胞內(nèi)羥基自由基的檢測(cè)對(duì)于了解適當(dāng)?shù)募?xì)胞氧化還原調(diào)節(jié)及其失調(diào)對(duì)各種病理的影響至關(guān)重要。羥基自由基（'OH）是與其他分子高度反應(yīng)以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定性的活性氧（ROS）之一。一般來說，羥基自由基被認(rèn)為是氧化代謝的有害副產(chǎn)物，可對(duì)生命系統(tǒng)造成分子損傷。它的平均壽命為10-9納秒，幾乎可以與所有生物分子反應(yīng)，如核DNA，線粒體DNA，蛋白質(zhì)和膜脂質(zhì)。亞洲空運(yùn)中心Bioquest的細(xì)胞計(jì)?線粒體羥基自由基檢測(cè)試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可檢測(cè)線粒體中的羥基自由基。MitoROS? OH580是活細(xì)胞通透探針，可以快速、選擇性地靶向活細(xì)胞中的羥基自由基。當(dāng)它與'OH反應(yīng)時(shí)，它會(huì)產(chǎn)生紅色熒光，并且很容易讀取。細(xì)胞計(jì)?線粒體羥基自由基檢測(cè)試劑盒提供了一種靈敏的熒光探針，可在孵育一小時(shí)后檢測(cè)活細(xì)胞中的OH'。該試劑盒可用于熒光酶標(biāo)儀和熒光顯微鏡應(yīng)用。
 
組件
 
組分 A：米托羅斯? OH580    1瓶
組分B：檢測(cè)緩沖液     1 瓶 （50 mL）
組件C：DMSO     1 瓶 （100 μL）
 
示例協(xié)議
 
一目了然
協(xié)議摘要
 

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞
2. 用MitoROS? OH580工作溶液在37°C孵育細(xì)胞60分鐘
3. 用測(cè)試化合物孵育細(xì)胞（以誘導(dǎo)OH-)
4. 監(jiān)測(cè)Ex/Em= 540/590 nm處的熒光增加

 
重要注意事項(xiàng)
使用前在室溫下解凍所有組件。
 
儲(chǔ)備液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. MitoROS OH580儲(chǔ)備溶液（500X）：
將50 μL DMSO（組分C）加入MitoROS? OH580（組分A）的小瓶中，并充分混合。?注意：25 uL 儲(chǔ)備溶液足以用于 1 個(gè)板。注意：如果未使用的部分可以等分并在≤-20oC下儲(chǔ)存超過一個(gè)月，如果管子密封嚴(yán)密并保持避光。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
 
工作溶液的制備
將 25 μL 500X DMSO 重構(gòu)的 MitoROS? OH580 儲(chǔ)備溶液加入 10 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中?；旌暇鶆?。注意：該工作溶液在室溫下可穩(wěn)定至少2小時(shí)。
 
實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 取出培養(yǎng)基，向細(xì)胞板中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 MitoROS? OH580 工作溶液。將細(xì)胞在 37°C 下孵育 60 分鐘。
2. 為了誘導(dǎo)羥基自由基，請(qǐng)?jiān)?37°C 下用所需緩沖液（例如 PBS 或 HHBS）中的測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間，避光。注意：我們用芬頓反應(yīng)（10μM CuCl2和 100 μM H2O2） 在 37°C 下 1 小時(shí)以誘導(dǎo)外源性羥基自由基。有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)參見圖 1。我們?cè)?64°C的生長培養(yǎng)基中用PMA（佛波醇7-肉豆蔻酸12-乙酸酯）處理RAW 13.37細(xì)胞4小時(shí)，以刺激內(nèi)源性羥基自由基。
3. 用 HHBS 或 DPBS 洗滌細(xì)胞 2 - 3 次，并向每個(gè)孔中加入 100 μL 測(cè)定緩沖液（組分 B）。
4. 使用帶有TRITC濾光片組的熒光顯微鏡監(jiān)測(cè)細(xì)胞中的熒光信號(hào)，或使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 540 / 590 nm（截止= 570 nm）下測(cè)量熒光增加，底部讀取模式。