產(chǎn)品說(shuō)明：
我們的Cell Explorer?熒光成像試劑盒是一套用于標(biāo)記細(xì)胞的工具，用于細(xì)胞功能的熒光顯微鏡研究。細(xì)胞的有效標(biāo)記為在空間和時(shí)間背景下研究細(xì)胞事件提供了一種強(qiáng)大的方法。這種特殊的試劑盒旨在用藍(lán)色熒光均勻標(biāo)記活細(xì)胞，用于需要熒光標(biāo)簽分子在細(xì)胞內(nèi)保留相對(duì)較長(zhǎng)時(shí)間的研究。該試劑盒使用帶有細(xì)胞保留部分的弱熒光染料。染料在進(jìn)入活細(xì)胞時(shí)會(huì)變成強(qiáng)烈的熒光，并被困在活細(xì)胞內(nèi)，以在相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)發(fā)出穩(wěn)定的熒光信號(hào)。該染料是一種疏水性化合物，很容易滲透到完整的活細(xì)胞中。標(biāo)簽過(guò)程非常強(qiáng)大，需要最少的手動(dòng)操作時(shí)間。它可以很容易地適應(yīng)各種熒光平臺(tái)，如微孔板測(cè)定、免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)。它可用于各種研究，包括細(xì)胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該試劑盒通過(guò)優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記方案提供所有基本組件。
平臺(tái)
流式細(xì)胞儀
Excitation：350 nm 或 405 nm 激光
Emission：450/40 nm 濾光片
儀器規(guī)格：Pacific Blue channel
熒光顯微鏡
Excitation：DAPI 篩選器
Emission：DAPI 篩選器
推薦板：黑色墻壁/透明底部
組件
組件 A：Track It? Blue—2瓶
組件B：DMSO—1 瓶 （0.2 mL）
組分C：檢測(cè)緩沖液—1 瓶 （20 mL）
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
Track It? 藍(lán)色儲(chǔ)備溶液 （2 mM）
將 25 μL DMSO（組分 B）加入一瓶 Track It Blue（組分 A）中，充分混合制成 2 mM Track It?? Blue 儲(chǔ)備溶液。
工作溶液的制備
Track It?藍(lán)色工作解決方案
將 2 mM Track It? Blue 儲(chǔ)備溶液稀釋到分析緩沖液（組分 C）中，制成 5 至 50 μM Track It? Blue 工作溶液。
注意此Track It? Blue工作溶液應(yīng)以適當(dāng)?shù)臐舛葹?00 μL/孔為所有孔制備足夠的溶液。例如，要獲得一個(gè) 20 孔微孔板終濃度為 96 μM 的 Track It? Blue，請(qǐng)將 10 μL Track It Blue 儲(chǔ)備溶液稀釋到 1 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 C）中，制成 1 mL 20 μM （1X） Track It?? Blue 工作溶液。
注意 Track It? Blue的最終濃度應(yīng)根據(jù)不同細(xì)胞類型和/或?qū)嶒?yàn)條件的經(jīng)驗(yàn)確定。建議在至少超過(guò)十倍范圍的濃度下進(jìn)行測(cè)試。
注意 我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系來(lái)說(shuō)，2 μM最終孔濃度就足夠了。
實(shí)驗(yàn)方案樣本
我們的Cell Explorer?熒光成像試劑盒是一套用于標(biāo)記細(xì)胞的工具，用于細(xì)胞功能的熒光顯微鏡研究。細(xì)胞的有效標(biāo)記為在空間和時(shí)間背景下研究細(xì)胞事件提供了一種強(qiáng)大的方法。這種特殊的試劑盒旨在用藍(lán)色熒光均勻標(biāo)記活細(xì)胞，用于需要熒光標(biāo)簽分子在細(xì)胞內(nèi)保留相對(duì)較長(zhǎng)時(shí)間的研究。該試劑盒使用帶有細(xì)胞保留部分的弱熒光染料。染料在進(jìn)入活細(xì)胞時(shí)會(huì)變成強(qiáng)烈的熒光，并被困在活細(xì)胞內(nèi)，以在相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)發(fā)出穩(wěn)定的熒光信號(hào)。該染料是一種疏水性化合物，很容易滲透到完整的活細(xì)胞中。標(biāo)簽過(guò)程非常強(qiáng)大，需要最少的手動(dòng)操作時(shí)間。它可以很容易地適應(yīng)各種熒光平臺(tái)，如微孔板測(cè)定、免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)。它可用于各種研究，包括細(xì)胞粘附、趨化性、多藥耐藥性、細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞毒性。該試劑盒通過(guò)優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記方案提供所有基本組件。
平臺(tái)
流式細(xì)胞儀
Excitation：350 nm 或 405 nm 激光
Emission：450/40 nm 濾光片
儀器規(guī)格：Pacific Blue channel
熒光顯微鏡
Excitation：DAPI 篩選器
Emission：DAPI 篩選器
推薦板：黑色墻壁/透明底部
組件
組件 A：Track It? Blue—2瓶
組件B：DMSO—1 瓶 （0.2 mL）
組分C：檢測(cè)緩沖液—1 瓶 （20 mL）
- 準(zhǔn)備樣品
- 加入 1X Track It? Blue 工作溶液（100 μL/孔）
- 將細(xì)胞在 37°C 下染色 15 至 60 分鐘
- 清洗細(xì)胞
- 使用DAPI濾光片或帶450 nm濾光片的流式細(xì)胞儀（太平洋藍(lán)色通道）在熒光顯微鏡下檢查標(biāo)本
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
Track It? 藍(lán)色儲(chǔ)備溶液 （2 mM）
將 25 μL DMSO（組分 B）加入一瓶 Track It Blue（組分 A）中，充分混合制成 2 mM Track It?? Blue 儲(chǔ)備溶液。
工作溶液的制備
Track It?藍(lán)色工作解決方案
將 2 mM Track It? Blue 儲(chǔ)備溶液稀釋到分析緩沖液（組分 C）中，制成 5 至 50 μM Track It? Blue 工作溶液。
注意此Track It? Blue工作溶液應(yīng)以適當(dāng)?shù)臐舛葹?00 μL/孔為所有孔制備足夠的溶液。例如，要獲得一個(gè) 20 孔微孔板終濃度為 96 μM 的 Track It? Blue，請(qǐng)將 10 μL Track It Blue 儲(chǔ)備溶液稀釋到 1 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 C）中，制成 1 mL 20 μM （1X） Track It?? Blue 工作溶液。
注意 Track It? Blue的最終濃度應(yīng)根據(jù)不同細(xì)胞類型和/或?qū)嶒?yàn)條件的經(jīng)驗(yàn)確定。建議在至少超過(guò)十倍范圍的濃度下進(jìn)行測(cè)試。
注意 我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系來(lái)說(shuō)，2 μM最終孔濃度就足夠了。
實(shí)驗(yàn)方案樣本
- 取出生長(zhǎng)培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞一次。
- 向每個(gè)孔中加入 100 μL Track It? Blue 工作溶液 （1X）。
- 將細(xì)胞在 37°C、5% CO 2 培養(yǎng)箱中孵育 15 至 60 分鐘。
- 用漢克斯和20mMHepes緩沖液（HHBS）或適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌細(xì)胞。
- 用檢測(cè)緩沖液或適當(dāng)?shù)木彌_液填充細(xì)胞孔。
- 使用帶有DAPI濾光片的熒光顯微鏡或帶450/40nm濾光片（太平洋藍(lán)通道）的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞。