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產(chǎn)品說(shuō)明：
我們的細(xì)胞計(jì)?檢測(cè)試劑盒是一套用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。該特定試劑盒旨在通過(guò)測(cè)量線粒體膜電位的損失來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。線粒體膜電位的崩潰與線粒體通透性過(guò)渡孔的打開相吻合，導(dǎo)致 xi胞se素C釋放到細(xì)胞質(zhì)中，進(jìn)而觸發(fā)凋亡級(jí)聯(lián)中的其他下游事件。我們的細(xì)胞計(jì)? NIR膜電位檢測(cè)試劑盒為所有基本組件提供了優(yōu)化的測(cè)定方法，用于檢測(cè)線粒體膜電位喪失的細(xì)胞凋亡。該熒光測(cè)定基于我們專有的陽(yáng)離子MitoLite NIR?染料對(duì)細(xì)胞中線粒體膜電位的檢測(cè)。在正常細(xì)胞中，MitoLite NIR主要在線粒體中積累，然而，在凋亡細(xì)胞中，MitoLite NIR??染色強(qiáng)度降低。用MitoLite NIR?染色的細(xì)胞可以通過(guò)具有紅色激發(fā)和遠(yuǎn)紅發(fā)射（FL4通道）的流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行可視化。該試劑盒可與其他試劑配對(duì)，例如藍(lán)激發(fā)碘化丙啶和細(xì)胞計(jì)?磷脂酰絲an酸凋亡檢測(cè)試劑盒（#22803），用于細(xì)胞活力和凋亡的多參數(shù)研究。該試劑盒經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)篩選細(xì)胞凋亡激活劑和抑制劑。
組件
組件 A：DMSO 中的 200X MitoLite? NIR   1 瓶 （500 μL）
組分B：檢測(cè)緩沖液    1 瓶 （100 mL）

1. 用密度為 5 × 10 的測(cè)試化合物制備細(xì)胞⁵至 1 × 10⁶細(xì)胞/毫升
2. 將 5 μL 200X MitoLite? NIR 加入 1 mL 細(xì)胞溶液中
3. 將細(xì)胞在37°C，5%CO中孵育2培養(yǎng)箱15-30分鐘
4. 沉淀細(xì)胞，并將細(xì)胞重懸于1 mL生長(zhǎng)培養(yǎng)基中
5. 使用具有FL4通道的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

重要說(shuō)明：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒成分。
實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 對(duì)于每個(gè)樣品，在您選擇的 1 mL 溫?zé)崤囵B(yǎng)基或緩沖液中制備細(xì)胞，密度為 5×10⁵至 1×10⁶細(xì)胞/毫升。注意：應(yīng)單獨(dú)評(píng)估每個(gè)細(xì)胞系，以確定誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的最佳細(xì)胞密度。
2. 用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并建立平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

對(duì)于陰性對(duì)照：僅用載體處理細(xì)胞。
對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照：用FCCP或CCCP在5 oC，50%CO中以37-5μM處理細(xì)胞2培養(yǎng)箱15至30分鐘。注意：CCCP或FCCP可以與MitoLite? NIR同時(shí)添加。為了獲得最佳結(jié)果，可能需要對(duì)每個(gè)單獨(dú)的細(xì)胞系滴定CCCP或FCCP。

3. 向處理過(guò)的細(xì)胞中加入 5 μL 200X MitoLite? NIR（組分 A）。
4. 將細(xì)胞在37°C，5%CO 2培養(yǎng)箱中孵育15至30分鐘。注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在用MitoLite? NIR染料負(fù)載溶液孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。
5. 以 1000 rpm 離心細(xì)胞 4 分鐘，然后將細(xì)胞重新懸浮在 1 mL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）或您選擇的緩沖液中。
6. 使用具有FL4通道的流式細(xì)胞儀（Ex / Em = 635 / 660 nm）監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。對(duì)感興趣的細(xì)胞進(jìn)行門控，不包括碎片。