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產(chǎn)品說明：
該特定試劑盒旨在通過測量線粒體膜電位（MMP）的損失來檢測細胞凋亡。線粒體膜電位的崩潰與線粒體通透性過渡孔的打開相吻合，導致 xi胞se素C釋放到細胞質中，進而觸發(fā)凋亡級聯(lián)中的其他下游事件。我們的細胞計?橙色線粒體膜電位檢測試劑盒通過優(yōu)化的檢測方法提供所有必需的成分。該熒光測定使用我們專有的陽離子MitoLite?橙來檢測線粒體膜電位喪失的細胞凋亡。在正常細胞中，當線粒體中積累MitoLite?橙色時，紅色熒光強度增加。然而，在凋亡細胞中，MitoLite?橙的熒光強度在MMP崩潰后降低。用MitoLite?橙色染色的細胞可以用流式細胞儀在488nm激發(fā)下以紅色發(fā)射（FL2通道）觀察。該試劑盒可與其他試劑一起使用，例如細胞計?磷脂酰絲an酸凋亡檢測試劑盒（22835），用于細胞活力和細胞凋亡的多參數(shù)研究。該試劑盒針對使用流式細胞儀篩選細胞凋亡激活劑和抑制劑進行了優(yōu)化。
組件
組件 A：DMSO 中的 500X MitoTell Orange ?  1 瓶 （200 μL）
組分B：檢測緩沖液    1 瓶 （100 mL）

1. 用密度為 5 × 10 的測試化合物制備細胞⁵至 1 × 10⁶細胞/毫升
2. 將 2 μL 的 500X MitoTell? 橙子加入 1 mL 細胞溶液中
3. 將細胞在37°C，5%CO中孵育2培養(yǎng)箱 15 - 30 分鐘
4. 沉淀細胞，并將細胞重懸于1 mL生長培養(yǎng)基中
5. 使用具有FL2通道的流式細胞儀分析細胞

重要說明：在開始實驗之前，在室溫下解凍所有試劑盒成分。
實驗方案樣本

1. 對于每個樣品，在您選擇的 1 mL 溫熱培養(yǎng)基或緩沖液中制備細胞，密度為 5×105至 1×106細胞/毫升。注意：應單獨評估每個細胞系，以確定誘導細胞凋亡的最佳細胞密度。
2. 用測試化合物處理細胞一段時間以誘導細胞凋亡，并建立平行對照實驗。

對于陰性對照：僅用載體處理細胞。
對于陽性對照：用FCCP或CCCP在5 oC，50%CO中以37-5μM處理細胞2培養(yǎng)箱15至30分鐘。注意：CCCP或FCCP可以與MitoTell? Orange同時添加。為了獲得最佳結果，可能需要對每個單獨的細胞系滴定CCCP或FCCP。

3. 向處理過的細胞中加入 2 μL 500X MitoTell? 橙（組分 A）。
4. 將細胞在37°C，5%CO中孵育2培養(yǎng)箱15至30分鐘。注意：對于貼壁細胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在用MitoTell?橙染料負載溶液孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細胞一次。
5. 以 1000 rpm 離心細胞 4 分鐘，然后將細胞重新懸浮在 1 mL 檢測緩沖液（組分 B）或您選擇的緩沖液中。
6. 使用具有FL2通道的流式細胞儀（Ex / Em = 540 / 590 nm）監(jiān)測熒光強度。對感興趣的細胞進行門控，不包括碎片。