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產(chǎn)品說(shuō)明：
我們的細(xì)胞計(jì)?檢測(cè)試劑盒是一套用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。該特定試劑盒旨在通過(guò)測(cè)量活細(xì)胞中的通用半胱天冬酶3/7活化來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。半胱天冬酶3/7活化被廣泛接受為細(xì)胞凋亡的可靠指標(biāo)。半胱天冬酶對(duì)肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物選擇性。該試劑盒使用TF2-DEVD-FMK作為半胱天冬酶3/7活性的熒光指示劑。TF2-DEVD-FMK是細(xì)胞滲透性，無(wú)毒，并且不可逆地與凋亡細(xì)胞中的活化干酪酶3/7結(jié)合。一旦與半胱天冬酶結(jié)合，紅色熒光試劑就保留在細(xì)胞內(nèi)。結(jié)合事件阻止半胱天冬酶進(jìn)一步催化，但不會(huì)阻止細(xì)胞凋亡的進(jìn)行。試劑將在加入培養(yǎng)基后15分鐘內(nèi)開(kāi)始與活性半胱天冬酶反應(yīng)。該試劑盒通過(guò)優(yōu)化的檢測(cè)方案提供所有基本組件。它用于定量凋亡細(xì)胞中大多數(shù)活化的半胱天冬酶活性，或用于篩選半胱天冬酶抑制劑。綠色標(biāo)簽允許通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)直接檢測(cè)凋亡細(xì)胞中活化的半胱天冬酶。
組件
組件 A：500X TF2-開(kāi)發(fā)-FMK—1 瓶 （100 μL）
組分B：檢測(cè)緩沖液—1 瓶 （50 mL）
組分C：500X碘化丙啶—1 瓶 （100 μL）

1. 用密度為 5 × 10 的測(cè)試化合物制備細(xì)胞⁵至1×10⁶細(xì)胞/毫升
2. 將 1 μL 500X TF2-DEVD-FMK 加入 0.5 mL 細(xì)胞溶液中
3. 在 37°C、5% CO 下孵育2培養(yǎng)箱 1 - 4 小時(shí)
4. 沉淀細(xì)胞并將細(xì)胞重懸于0.5 mL測(cè)定緩沖液或生長(zhǎng)培養(yǎng)基中
5. 使用帶 530/30 nm 濾光片的流式細(xì)胞儀（FITC通道）分析細(xì)胞

重要說(shuō)明：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊薪M分。
實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 對(duì)于每個(gè)樣品，在您選擇的 0.5 mL 溫?zé)崤囵B(yǎng)基或緩沖液中制備細(xì)胞，密度為 5×10⁵至 1×10⁶細(xì)胞/毫升。注意：應(yīng)單獨(dú)評(píng)估每個(gè)細(xì)胞系，以確定誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的最佳細(xì)胞密度。
2. 用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并產(chǎn)生陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
3. 向處理過(guò)的細(xì)胞中加入 1 μL 500X TF2-DEVD-FMK（組分 A）。
4. 將細(xì)胞在 37°C、5% CO 中孵育₂培養(yǎng)箱1-4小時(shí)。注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，用0.5mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在用TF2-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所使用的單個(gè)細(xì)胞類(lèi)型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。
5. 洗滌并旋轉(zhuǎn)細(xì)胞兩次。將細(xì)胞重懸于0.5 mL測(cè)定緩沖液或生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。注意：TF2-DEVD-FMK是熒光的;首先，洗掉任何未結(jié)合的試劑以去除背景非常重要。
6. 如果需要，用DNA染色劑標(biāo)記細(xì)胞（例如碘化丙啶或死細(xì)胞的7-AAD）。
7. 如果需要，請(qǐng)固定單元格。
8. 使用帶有530/30nm濾光片（FITC通道）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。對(duì)感興趣的細(xì)胞進(jìn)行門(mén)控，不包括碎片。