產(chǎn)品說(shuō)明：
我們的細(xì)胞計(jì)?檢測(cè)試劑盒是一套用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。該特定試劑盒旨在通過(guò)測(cè)量磷脂酰絲an酸（PS）的易位來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞凋亡中，PS被轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外小葉上。磷脂酰絲an酸在細(xì)胞表面的出現(xiàn)是細(xì)胞凋亡初始/中間階段的通用指標(biāo)，可以在觀察到形態(tài)變化之前檢測(cè)到。該試劑盒使用特異性結(jié)合PS的熒光膜聯(lián)蛋白V.膜聯(lián)蛋白V偶聯(lián)物已被證明可以選擇性結(jié)合PS。該特定檢測(cè)試劑盒經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可使用具有FITC通道（綠色熒光）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。
組件
組分 A：Annexin V-iFluor? 488（100X 儲(chǔ)備溶液） 1 瓶（200 μL/瓶）
組分B：測(cè)定緩沖液（4°C） 1 瓶 （50 mL）
組分C：100X碘化丙啶 1 瓶 （100 μL）
實(shí)驗(yàn)方案樣本
我們的細(xì)胞計(jì)?檢測(cè)試劑盒是一套用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。該特定試劑盒旨在通過(guò)測(cè)量磷脂酰絲an酸（PS）的易位來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞凋亡中，PS被轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外小葉上。磷脂酰絲an酸在細(xì)胞表面的出現(xiàn)是細(xì)胞凋亡初始/中間階段的通用指標(biāo)，可以在觀察到形態(tài)變化之前檢測(cè)到。該試劑盒使用特異性結(jié)合PS的熒光膜聯(lián)蛋白V.膜聯(lián)蛋白V偶聯(lián)物已被證明可以選擇性結(jié)合PS。該特定檢測(cè)試劑盒經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可使用具有FITC通道（綠色熒光）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。
組件
組分 A：Annexin V-iFluor? 488（100X 儲(chǔ)備溶液） 1 瓶（200 μL/瓶）
組分B：測(cè)定緩沖液（4°C） 1 瓶 （50 mL）
組分C：100X碘化丙啶 1 瓶 （100 μL）
- 用測(cè)試化合物制備細(xì)胞（200 μL/樣品）
- 添加膜聯(lián)蛋白V-iFluor? 488儲(chǔ)備溶液
- 在室溫下孵育 30 - 60 分鐘
- 使用帶 530/30 nm 濾光片的流式細(xì)胞儀（FITC通道）分析細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)方案樣本
- 用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間（用喜shu堿處理的Jurkat細(xì)胞為4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。注意：貼壁細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白V流式細(xì)胞術(shù)分析不常規(guī)測(cè)試，因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲過(guò)程中可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，利用膜聯(lián)蛋白V對(duì)貼壁細(xì)胞類型進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人報(bào)道。
- 離心細(xì)胞得到 1 - 5 × 105細(xì)胞/管。
- 將細(xì)胞重懸于 200 μL 檢測(cè)緩沖液（組分 B）中。
- 向細(xì)胞中加入 2 μL 膜聯(lián)蛋白 V-iFluor? 488（組分 A）。
- 自選：加入 2 μL 100X 碘化丙啶（組分 C）用于壞死細(xì)胞。
- 在室溫下孵育 30 至 60 分鐘，避光。
- 自選：在用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前，加入 200 至 300 μL 測(cè)定緩沖液（組分 B）以增加體積。
- 使用帶488/530 nm濾光片（FITC通道）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)膜聯(lián)蛋白V-iFluor? 30的熒光強(qiáng)度。當(dāng)將碘化丙啶添加到細(xì)胞中時(shí)，使用610 / 20 nm過(guò)濾器（PE- Texas Red channel）測(cè)量細(xì)胞活力。