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產(chǎn)品說明：
膜聯(lián)蛋白V可與包括APC在內(nèi)的熒光染料偶聯(lián)。這種形式保留了其對磷脂酰絲an酸（PS）的高親和力，因此可作為正在經(jīng)歷細胞凋亡的細胞流式細胞術(shù)分析的靈敏探針。由于PS的外化發(fā)生在細胞凋亡的早期階段，APC膜聯(lián)蛋白V染色可以在比基于核變化（如DNA片段化）的測定更早的階段識別細胞凋亡。APC膜聯(lián)蛋白V染色先于膜完整性的喪失，膜完整性的喪失伴隨著由凋亡或壞死過程引起的細胞死亡的最新階段。因此，用APC膜聯(lián)蛋白V染色通常與重要染料（如碘化丙啶（PI）或7-氨基放線菌素（7-AAD））結(jié)合使用，以使研究人員能夠識別早期凋亡細胞。
組件
組分A：APC-膜聯(lián)蛋白V偶聯(lián)物—1瓶
組分B：測定緩沖液（4°C）—1 瓶 （50 mL）
組分C：100X碘化丙啶—1 瓶 （100 μL）

1. 用測試化合物制備細胞（200 μL/樣品）
2. 添加APC-膜聯(lián)蛋白V檢測溶液
3. 在室溫下孵育 20 - 60 分鐘
4. 使用帶有 660/20 nm 濾光片的流式細胞儀分析細胞（APC 通道）

重要說明：在開始實驗之前，在室溫下解凍100X碘化丙啶（組分C）。
儲備液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。
1. APC-膜聯(lián)蛋白V儲備溶液（100X）：將200 μL PBS和0.2%BSA加入APC-膜聯(lián)蛋白V偶聯(lián)物（組分A）的小瓶中，充分混合制成100X APC-膜聯(lián)蛋白V儲備溶液。
注意：將重組的100X APC-膜聯(lián)蛋白V儲備溶液儲存在4^oC. 不要凍結(jié)。
實驗方案樣本

1. 用測試化合物處理細胞一段時間（用星形孢菌素處理的Jurkat細胞為4-6小時）以誘導細胞凋亡。注意：貼壁細胞的膜聯(lián)蛋白V流式細胞術(shù)分析不常規(guī)測試，因為在細胞分離或收獲過程中可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，利用膜聯(lián)蛋白V對貼壁細胞類型進行流式細胞術(shù)的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人報道。
2. 離心細胞得到1-5×10⁵細胞/管。
3. 將細胞重懸于 200 μL 檢測緩沖液（組分 B）中。
4. 向細胞中加入 2 μL 100X APC-膜聯(lián)蛋白 V 儲備溶液。
5. 自選：將 2 μL 100X 碘化丙啶（組分 C）加入壞死細胞細胞中。
6. 在室溫下孵育 20 至 60 分鐘，避光。
7. 自選：在用流式細胞儀分析細胞之前，加入 200 至 300 μL 測定緩沖液（組分 B）以增加體積。
8. 使用帶有660/20nm濾光片（APC通道）的流式細胞儀監(jiān)測APC-膜聯(lián)蛋白V的熒光強度。當將碘化丙啶添加到細胞中時，使用 610/20 nm 濾光片（PE- Texas Red channel）測量細胞活力。