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產(chǎn)品說明：
       膜聯(lián)蛋白V可與包括PE在內(nèi)的熒光染料偶聯(lián)。這種形式保留了其對磷脂酰絲an酸（PS）的高親和力，因此可作為正在經(jīng)歷細(xì)胞凋亡的細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)分析的靈敏探針。由于PS的外化發(fā)生在細(xì)胞凋亡的早期階段，因此PE膜聯(lián)蛋白V染色可以在比基于核變化（如DNA片段化）的測定更早的階段識別細(xì)胞凋亡。PE膜聯(lián)蛋白V染色先于膜完整性的喪失，伴隨著由凋亡或壞死過程引起的細(xì)胞死亡的最新階段。因此，PE膜聯(lián)蛋白V染色通常與重要染料（如碘化丙啶（PI）或7-氨基放線菌素（7-AAD））結(jié)合使用，以使研究者能夠識別早期凋亡細(xì)胞（7-AAD陰性，PE膜聯(lián)蛋白V陽性）。具有完整膜的活細(xì)胞排除7-AAD，而死亡和受損細(xì)胞的膜可滲透7-AAD。例如，被認(rèn)為是活的細(xì)胞是PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陰性，而處于早期細(xì)胞凋亡的細(xì)胞是PE膜聯(lián)蛋白V陽性和7-AAD陰性，而晚期細(xì)胞凋亡或已經(jīng)死亡的細(xì)胞都是PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽性。該測定不區(qū)分經(jīng)歷凋亡死亡的細(xì)胞和因壞死途徑而死亡的細(xì)胞，因?yàn)樵谌魏我环N情況下，死細(xì)胞都會用PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD染色。然而，當(dāng)隨著時(shí)間的推移測量細(xì)胞凋亡時(shí)，通常可以從PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陰性（活或無可測量的細(xì)胞凋亡）到PE膜聯(lián)蛋白V陽性和7-AAD陰性（早期細(xì)胞凋亡，膜完整性存在），最后到PE膜聯(lián)蛋白V和7-AAD陽性（終末期細(xì)胞凋亡和死亡）。細(xì)胞通過這三個(gè)階段的運(yùn)動(dòng)表明細(xì)胞凋亡。相比之下，表明細(xì)胞既是PE膜聯(lián)蛋白V陽性又是7-AAD陽性的單一觀察本身揭示了關(guān)于細(xì)胞經(jīng)歷死亡過程的信息較少。
組件
組分A：RPE-膜聯(lián)蛋白V—1瓶
組分B：測定緩沖液（4°C）—1 瓶 （50 mL）
組件C：100X核紅色DCS?—1 瓶 （100 μL）

1. 用測試化合物制備細(xì)胞（200 μL/樣品）
2. 添加 RPE-膜聯(lián)蛋白 V 檢測溶液
3. 在室溫下孵育 20 - 60 分鐘
4. 使用575/26 nm濾光片（PE通道）的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞

儲備液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. RPE-膜聯(lián)蛋白 V 儲備溶液 （100X）：
將 200 μL PBS 和 0.2% BSA 加入 RPE-膜聯(lián)蛋白 V 小瓶（組分 A）中，制成 100X RPE-膜聯(lián)蛋白 V 儲備溶液。注意：將重組的 100X RPE-膜聯(lián)蛋白 V 儲備溶液儲存在 4°C。 不要凍結(jié)。
實(shí)驗(yàn)方案樣本

1. 用測試化合物處理細(xì)胞所需的時(shí)間（用星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞為4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。注意：貼壁細(xì)胞的膜聯(lián)蛋白V流式細(xì)胞術(shù)分析不常規(guī)測試，因?yàn)樵诩?xì)胞分離或收獲過程中可能發(fā)生特定的膜損傷。然而，利用膜聯(lián)蛋白V對貼壁細(xì)胞類型進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人報(bào)道。
2. 離心細(xì)胞得到 1 - 5 × 10⁵細(xì)胞/管。
3. 將細(xì)胞重懸于 200 μL 檢測緩沖液（組分 B）中。
4. 向細(xì)胞中加入 2 μL 100X RPE-膜聯(lián)蛋白 V 儲備溶液。
5. 自選：加入 2 μL 100X 核紅? DCS（組分 C）用于壞死細(xì)胞。
6. 在室溫下孵育 20 至 60 分鐘，避光。
7. 可選：在使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前，加入 200 至 300 μL 檢測緩沖液（組分 B）以增加體積。
8. 使用帶有575/26nm濾光片（PE通道）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測RPE-膜聯(lián)蛋白V的熒光強(qiáng)度。當(dāng)將核紅色? DCS添加到細(xì)胞中時(shí)，使用660 / 20 nm濾光片（APC通道）測量細(xì)胞活力。