產(chǎn)品說明:
細(xì)胞周期有四個(gè)連續(xù)的階段:G0/G1、S、G2 和 M。在細(xì)胞通過細(xì)胞周期的過程中,其DNA在S(合成)階段復(fù)制,并在M(有絲分裂)階段平均分布在兩個(gè)子細(xì)胞之間。這兩個(gè)階段由兩個(gè)間隙階段隔開:G0/G1 和 G2。這兩個(gè)間隙階段為細(xì)胞生長提供了時(shí)間,并使蛋白質(zhì)和細(xì)胞器的質(zhì)量翻倍。細(xì)胞也使用它們來監(jiān)測(cè)內(nèi)部和外部條件,然后再進(jìn)行細(xì)胞周期的下一階段。細(xì)胞通過細(xì)胞周期的通道由許多不同的調(diào)節(jié)蛋白控制。該檢測(cè)試劑盒旨在通過在活細(xì)胞中使用我們專有的核紅? CCS2來監(jiān)測(cè)細(xì)胞周期進(jìn)程和增殖。給定樣品中處于G0 / G1,S和G2 / M期的細(xì)胞百分比,以及細(xì)胞凋亡前處于亞G1期的細(xì)胞百分比可以通過流式細(xì)胞術(shù)確定。用核紅? CCS2染色的細(xì)胞可以用流式細(xì)胞儀(PE- Texas Red channel)監(jiān)測(cè)。
組件
組件A:500X核紅CCS2? 1 瓶 (100 μL)
組分B:檢測(cè)緩沖液 1 瓶 (50 mL)
示例協(xié)議
一目了然
協(xié)議摘要
重要事項(xiàng) 在開始實(shí)驗(yàn)之前,在室溫下解凍所有組分。
實(shí)驗(yàn)方案樣本
| 激發(fā)(納米) 542 |
發(fā)射(納米) 580 |
細(xì)胞周期有四個(gè)連續(xù)的階段:G0/G1、S、G2 和 M。在細(xì)胞通過細(xì)胞周期的過程中,其DNA在S(合成)階段復(fù)制,并在M(有絲分裂)階段平均分布在兩個(gè)子細(xì)胞之間。這兩個(gè)階段由兩個(gè)間隙階段隔開:G0/G1 和 G2。這兩個(gè)間隙階段為細(xì)胞生長提供了時(shí)間,并使蛋白質(zhì)和細(xì)胞器的質(zhì)量翻倍。細(xì)胞也使用它們來監(jiān)測(cè)內(nèi)部和外部條件,然后再進(jìn)行細(xì)胞周期的下一階段。細(xì)胞通過細(xì)胞周期的通道由許多不同的調(diào)節(jié)蛋白控制。該檢測(cè)試劑盒旨在通過在活細(xì)胞中使用我們專有的核紅? CCS2來監(jiān)測(cè)細(xì)胞周期進(jìn)程和增殖。給定樣品中處于G0 / G1,S和G2 / M期的細(xì)胞百分比,以及細(xì)胞凋亡前處于亞G1期的細(xì)胞百分比可以通過流式細(xì)胞術(shù)確定。用核紅? CCS2染色的細(xì)胞可以用流式細(xì)胞儀(PE- Texas Red channel)監(jiān)測(cè)。
組件
組件A:500X核紅CCS2? 1 瓶 (100 μL)
組分B:檢測(cè)緩沖液 1 瓶 (50 mL)
示例協(xié)議
一目了然
協(xié)議摘要
- 用密度為 5 × 10 的測(cè)試化合物制備細(xì)胞5至 1× 106細(xì)胞/毫升
- 將 1 μL 500X 核紅? CCS2 加入 0.5 mL 細(xì)胞溶液中
- 在37°C,5%CO下孵育210 - 30 分鐘
- 使用具有PE- Texas Red channel的流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞(Ex / Em = 488 nm / 615 nm)
重要事項(xiàng) 在開始實(shí)驗(yàn)之前,在室溫下解凍所有組分。
實(shí)驗(yàn)方案樣本
- 對(duì)于每個(gè)樣品,在 0.5 mL 溫?zé)崤囵B(yǎng)基或您選擇的緩沖液中制備細(xì)胞,密度為 5×105至 1×106細(xì)胞/毫升。注意:應(yīng)單獨(dú)評(píng)估每個(gè)細(xì)胞系,以確定最佳細(xì)胞密度。
- 用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間,以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,細(xì)胞周期停滯或其他細(xì)胞周期功能。
- 在含有生長培養(yǎng)基的細(xì)胞中加入 1 μL 500X 核紅? CCS2(組分 A)。
- 將細(xì)胞在37°C,5%CO中孵育2培養(yǎng)箱10至30分鐘。注意:對(duì)于貼壁細(xì)胞,用0.5mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整,并在用核紅? CCS2孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所使用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。染色前無需固定細(xì)胞,因?yàn)楹思t? CCS2是細(xì)胞滲透的。
- 自選:以 1000 rpm 離心細(xì)胞 4 分鐘,然后將細(xì)胞重懸于 0.5 mL 測(cè)定緩沖液(組分 B)或您選擇的緩沖液中。
- 使用具有PE-Texas Red channel(Ex / Em = 488 / 615 nm)的流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。門控感興趣的細(xì)胞,不包括碎片。



