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產(chǎn)品說明：
線粒體是細胞超氧化物的主要生產(chǎn)者。產(chǎn)生低至中等水平的超氧化物對于正確調(diào)節(jié)許多基本細胞過程至關(guān)重要，包括基因表達、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和肌肉對耐力運動訓練的適應(yīng)。不受控制的線粒體超氧化物產(chǎn)生會引發(fā)細胞氧化損傷，從而導(dǎo)致多種疾病的發(fā)病機制，包括癌癥、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病和衰老。細胞內(nèi)線粒體超氧化物的檢測對于了解適當?shù)募毎趸€原調(diào)節(jié)及其失調(diào)對各種病理的影響至關(guān)重要。細胞計?熒光線粒體超氧化物活性測定試劑盒使用我們獨特的超氧化物指示劑來量化活細胞中的超氧化物水平。MitoROS? 580是活細胞通透性的，可以快速，選擇性地靶向線粒體中的超氧化物。當它與超氧化物反應(yīng)時會產(chǎn)生紅色熒光。細胞計?熒光法細胞內(nèi)超氧化物檢測試劑盒提供靈敏的一步熒光測定，可在孵育一小時后檢測活細胞中的線粒體超氧化物。該試劑盒可用于熒光酶標儀和熒光顯微鏡應(yīng)用。
組件
組件 A：MitoROS? 580—1瓶
組分B：檢測緩沖液—1 瓶 （20 mL）
組件C：DMSO—1 瓶 （100 μL）

1. 在生長培養(yǎng)基中制備細胞
2. 用測試化合物處理細胞以誘導(dǎo)超氧化物
3. 添加 MitoROS? 580 工作溶液
4. 將細胞在 37°C 下染色 30 - 60 分鐘
5. 在Ex/Em= 540/590 nm（截止= 570 nm）或帶有TRITC濾光片組的熒光顯微鏡下監(jiān)測熒光增加（底部讀數(shù)模式）

重要說明：在開始實驗之前，請在室溫下解凍所有組分。
儲備液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

1. MitoROS 580儲備溶液（500X）：將50 μL DMSO（組分C）加入MitoROS 580（組分A）的小瓶中，充分混合制成500X MitoROS??? 580儲備溶液。避光。注意：25 μL 500X MitoROS? 580 儲備溶液足以用于 1 個板。儲存時，請密封管子。

工作溶液的制備
將 25 μL 500X MitoROS 580 儲備溶液加入 10 mL 檢測緩沖液（組分 B）中，充分混合制成 MitoROS?? 580 工作溶液。注意：該MitoROS? 580工作溶液在室溫下可穩(wěn)定保存至少2小時。
實驗方案樣本

1. 在所需的緩沖液（如PBS或HHBS）中用10 μL 10X測試化合物（96孔板）或5 μL 5X測試化合物（384孔板）處理細胞。對于對照孔（未處理的細胞），加入相應(yīng)量的復(fù)合緩沖液。
2. 為了誘導(dǎo)超氧化物，將細胞板在37°C下孵育所需的時間，避光。注意：我們用50μM抗mei素A（AMA）在37°C下處理HeLa細胞30分鐘以誘導(dǎo)超氧化物。有關(guān)詳細信息，請參見圖 1。
3. 向細胞板中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 MitoROS? 580 工作溶液。
4. 將細胞在 37°C 下孵育 30 至 60 分鐘。
5. 使用熒光酶標儀（底部讀取模式）在Ex / Em = 540 / 590 nm（截止= 570 m）下監(jiān)測熒光增加，或使用帶有TRITC濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。