產(chǎn)品說(shuō)明：
細(xì)胞計(jì)?細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒是一種快速靈敏的檢測(cè)試劑盒，用于測(cè)量各種細(xì)胞類型的細(xì)胞間或細(xì)胞表面粘附性。在該測(cè)定中，細(xì)胞用鈣黃綠AM標(biāo)記并使其粘附。去除非貼壁細(xì)胞后，使用鈣黃綠超綠的熒光來(lái)計(jì)算貼壁細(xì)胞的數(shù)量。使用我們出色的熒光染料Calcein UltraGreen AM提供了一種快速靈敏的方法來(lái)測(cè)量細(xì)胞與各種細(xì)胞類型的粘附。鈣黃綠AM是非熒光的，但一旦加載到細(xì)胞中，就會(huì)被內(nèi)源性酯酶切割以產(chǎn)生高熒光鈣黃綠，這是一種明亮的熒光，pH依賴性的細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物，對(duì)細(xì)胞粘附過(guò)程的干擾最小。細(xì)胞計(jì)?細(xì)胞粘附測(cè)定設(shè)計(jì)用于熒光酶標(biāo)儀。鈣黃綠增材制造的強(qiáng)大性能和試劑盒的簡(jiǎn)單程序避免了與利用放射性同位素（產(chǎn)生危險(xiǎn)廢物）的測(cè)定以及依賴于使用共價(jià)偶聯(lián)細(xì)胞表面標(biāo)記的測(cè)定相關(guān)的問(wèn)題，這可能會(huì)改變細(xì)胞功能。
平臺(tái)
熒光顯微鏡
興奮：FITC有機(jī)硅濾光片套件
排放：FITC有機(jī)硅濾光片套件
推薦盤子：黑色墻壁/透明底部
熒光酶標(biāo)儀
興奮：490海里
排放：525海里
近路：515海里
推薦盤子：黑色墻壁/透明底部
組件
組分A：鈣黃綠素UltraGreen? AM——1 瓶
組分 B：粘附測(cè)定緩沖液——1 瓶 （25 mL）
組件 C：DMSO——1 瓶 （100 μL）
協(xié)議摘要
在涂有所需涂層材料的板上添加細(xì)胞
在37°C孵育細(xì)胞以使其附著
刪除未附加的單元格
添加鈣黃綠素增材制造工作溶液
將細(xì)胞在37°C孵育20-30分鐘
除去上清液并用HHBS或DPBS洗滌細(xì)胞
使用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光酶標(biāo)儀測(cè)量熒光強(qiáng)度
重要
在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
鈣黃綠素Ultragreen AM儲(chǔ)備液
將 50 μL DMSO（組分 C）加入 Calcein Ultragreen AM（組分 A）中并充分混合。
注意：將未使用的鈣黃綠素Ultragreen AM儲(chǔ)備溶液在-20°C下以一次性等分試樣儲(chǔ)存，以避免凍融循環(huán)。
工作溶液的制備
鈣黃綠素增材制造工作溶液
將 50 μL 鈣黃綠素 Ultragreen AM 儲(chǔ)備溶液加入 10 mL 粘附測(cè)定緩沖液中并充分混合。
注意：鈣黃綠素Ultragreen AM工作溶液不應(yīng)儲(chǔ)存，應(yīng)及時(shí)使用。
注意：10 mL 鈣綠增材制造工作溶液足以進(jìn)行 100 次測(cè)試。
實(shí)驗(yàn)方案樣本
以下協(xié)議可作為指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化。
在涂有所需包衣材料的平板上加入 100 μL 體積的細(xì)胞。
將板在37°C孵育2至3小時(shí)。
注意：對(duì)于每個(gè)細(xì)胞系，應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)試最佳孵育時(shí)間。
去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基和未附著的細(xì)胞。
加入100μL鈣綠素AM工作溶液，并將板在37°C孵育20-30分鐘。
注意：對(duì)于每個(gè)細(xì)胞系，應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)試最佳孵育時(shí)間。
除去染料工作溶液，用 1X Hank 鹽溶液和 20 mM Hepes 緩沖液或 DPBS 洗滌細(xì)胞一次。
向孔中加入 100 μL 粘附測(cè)定緩沖液。
使用熒光酶標(biāo)儀在 Ex/Em = 490/525 nm（截止 = 515 nm）處監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。
細(xì)胞計(jì)?細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒是一種快速靈敏的檢測(cè)試劑盒，用于測(cè)量各種細(xì)胞類型的細(xì)胞間或細(xì)胞表面粘附性。在該測(cè)定中，細(xì)胞用鈣黃綠AM標(biāo)記并使其粘附。去除非貼壁細(xì)胞后，使用鈣黃綠超綠的熒光來(lái)計(jì)算貼壁細(xì)胞的數(shù)量。使用我們出色的熒光染料Calcein UltraGreen AM提供了一種快速靈敏的方法來(lái)測(cè)量細(xì)胞與各種細(xì)胞類型的粘附。鈣黃綠AM是非熒光的，但一旦加載到細(xì)胞中，就會(huì)被內(nèi)源性酯酶切割以產(chǎn)生高熒光鈣黃綠，這是一種明亮的熒光，pH依賴性的細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物，對(duì)細(xì)胞粘附過(guò)程的干擾最小。細(xì)胞計(jì)?細(xì)胞粘附測(cè)定設(shè)計(jì)用于熒光酶標(biāo)儀。鈣黃綠增材制造的強(qiáng)大性能和試劑盒的簡(jiǎn)單程序避免了與利用放射性同位素（產(chǎn)生危險(xiǎn)廢物）的測(cè)定以及依賴于使用共價(jià)偶聯(lián)細(xì)胞表面標(biāo)記的測(cè)定相關(guān)的問(wèn)題，這可能會(huì)改變細(xì)胞功能。
平臺(tái)
熒光顯微鏡
興奮：FITC有機(jī)硅濾光片套件
排放：FITC有機(jī)硅濾光片套件
推薦盤子：黑色墻壁/透明底部
熒光酶標(biāo)儀
興奮：490海里
排放：525海里
近路：515海里
推薦盤子：黑色墻壁/透明底部
組件
組分A：鈣黃綠素UltraGreen? AM——1 瓶
組分 B：粘附測(cè)定緩沖液——1 瓶 （25 mL）
組件 C：DMSO——1 瓶 （100 μL）
協(xié)議摘要
在涂有所需涂層材料的板上添加細(xì)胞
在37°C孵育細(xì)胞以使其附著
刪除未附加的單元格
添加鈣黃綠素增材制造工作溶液
將細(xì)胞在37°C孵育20-30分鐘
除去上清液并用HHBS或DPBS洗滌細(xì)胞
使用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光酶標(biāo)儀測(cè)量熒光強(qiáng)度
重要
在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
鈣黃綠素Ultragreen AM儲(chǔ)備液
將 50 μL DMSO（組分 C）加入 Calcein Ultragreen AM（組分 A）中并充分混合。
注意：將未使用的鈣黃綠素Ultragreen AM儲(chǔ)備溶液在-20°C下以一次性等分試樣儲(chǔ)存，以避免凍融循環(huán)。
工作溶液的制備
鈣黃綠素增材制造工作溶液
將 50 μL 鈣黃綠素 Ultragreen AM 儲(chǔ)備溶液加入 10 mL 粘附測(cè)定緩沖液中并充分混合。
注意：鈣黃綠素Ultragreen AM工作溶液不應(yīng)儲(chǔ)存，應(yīng)及時(shí)使用。
注意：10 mL 鈣綠增材制造工作溶液足以進(jìn)行 100 次測(cè)試。
實(shí)驗(yàn)方案樣本
以下協(xié)議可作為指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化。
在涂有所需包衣材料的平板上加入 100 μL 體積的細(xì)胞。
將板在37°C孵育2至3小時(shí)。
注意：對(duì)于每個(gè)細(xì)胞系，應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)試最佳孵育時(shí)間。
去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基和未附著的細(xì)胞。
加入100μL鈣綠素AM工作溶液，并將板在37°C孵育20-30分鐘。
注意：對(duì)于每個(gè)細(xì)胞系，應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)試最佳孵育時(shí)間。
除去染料工作溶液，用 1X Hank 鹽溶液和 20 mM Hepes 緩沖液或 DPBS 洗滌細(xì)胞一次。
向孔中加入 100 μL 粘附測(cè)定緩沖液。
使用熒光酶標(biāo)儀在 Ex/Em = 490/525 nm（截止 = 515 nm）處監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。