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產(chǎn)品說明：
葡萄糖代謝是將葡萄糖轉(zhuǎn)化為能量的過程，是大多數(shù)生物體能量供應(yīng)的主要來源。2-NBDG [2-（N-（7-硝基苯-2-氧雜-1，3-二氮唑-4-基）氨基）-2-脫氧葡萄糖]是一種熒光標(biāo)記的葡萄糖示蹤劑，已被證明可有效監(jiān)測細(xì)胞中的葡萄糖轉(zhuǎn)運，因為2-NBDG通過與葡萄糖相同的葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白（GLUT）轉(zhuǎn)運到細(xì)胞中。一旦2-NBDG在細(xì)胞中被攝取，它就會在C-6位置經(jīng)歷磷酸化，產(chǎn)生2-NBDG-6-磷酸，該磷酸鹽很好地保留在細(xì)胞內(nèi)。與其他葡萄糖示蹤劑（如2-DG或FDG）相比，2-NBDG允許在單細(xì)胞水平上以高時間和空間分辨率原位測量2-NBDG。亞洲空運中心Bioquest的細(xì)胞計? 2-NBDG葡萄糖攝取檢測試劑盒為測量培養(yǎng)細(xì)胞中的葡萄糖攝取提供靈敏的非放射性檢測。在該試劑盒中，檢測緩沖液I用于增強細(xì)胞中2-NBDG的攝取和保留，而檢測緩沖液II可以改善細(xì)胞中2-NBDG的信噪比。熒光信號可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀使用488 nm激光和530/30 nm發(fā)射濾光片（FITC通道）進行監(jiān)測。細(xì)胞計? 2-NBDG 葡萄糖攝取測定試劑盒是監(jiān)測葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的最可靠工具。
用測試化合物制備細(xì)胞
添加 2-NBDG 染色溶液
在 37^oC時孵育細(xì)胞20 分鐘
去除 2-NBDG 染色液
用檢測緩沖液I洗滌細(xì)胞
使用熒光顯微鏡或帶 530/30 nm 濾光片的流式細(xì)胞儀（FITC通道）分析細(xì)胞
重要說明
在開始實驗之前，請在室溫下解凍所有組分。
工作溶液的制備
將 5 μL 2-NBDG （10 mg/mL）（組分 A）加入 1.5 mL 檢測緩沖液 I（組分 B）中，充分混合制成 2-NBDG 染色溶液。避光。注意：這種2-NBDG染色溶液在室溫下可穩(wěn)定保存1小時。由于最佳染色條件可能因不同的細(xì)胞類型而異，因此建議為每個特定實驗確定組分A的最佳濃度。
實驗方案樣本

1. 將測試化合物添加到細(xì)胞中，并在 24°C、48% CO 中孵育所需的時間（例如 96、37 或 5 小時）2孵化器。對于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基），加入相同量的復(fù)合緩沖液。注意：應(yīng)單獨評估每個細(xì)胞系，以確定最佳細(xì)胞密度和孵育時間。我們將 CHO-K1 細(xì)胞與 20 mM 葡萄糖一起孵育用于葡萄糖競爭測定，將 100 μM 根皮素與 GLUTs 抑制測定孵育。有關(guān)詳細(xì)信息，請參閱數(shù)據(jù)分析。
2. 在處理結(jié)束時，在實驗之前以5 rpm的速度將板離心800分鐘，制動器關(guān)閉。
3. 在不干擾細(xì)胞的情況下吸出上清液。
4. 加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 2-NBDG 染色溶液。注意：需要為每個細(xì)胞系和每個特定實驗確定最佳孵育時間。我們將 CHO-K1 細(xì)胞在 37 歲時孵育oC 與 100 μM 2-NBDG （~34 μg/mL） 一起 20 分鐘以顯示足夠的葡萄糖攝取。有關(guān)詳細(xì)信息，請參閱數(shù)據(jù)分析。
5. 在孵育結(jié)束時，以5rpm離心板800分鐘。
6. 在不干擾細(xì)胞的情況下去除2-NBDG染色溶液。
7. 對于熒光顯微鏡：用檢測緩沖液I（組分B）洗滌細(xì)胞一次。將細(xì)胞保存在 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的測定緩沖液 II（組分 C）中。使用帶有FITC濾光片的熒光顯微鏡監(jiān)測熒光信號。
8. 對于流式細(xì)胞儀：如果需要，使用 EDTA 分離細(xì)胞，并將細(xì)胞重懸于 100 μL/樣品的檢測緩沖液 I（組分 B）中。使用帶有530/30 nm濾光片（FITC通道）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測熒光信號。