Lympholyte-H人淋巴細胞分離液
產(chǎn)品貨號：CL5015-R
產(chǎn)品名稱：Lympholyte-H人淋巴細胞分離液
產(chǎn)品規(guī)格：5x30mL/100mL/6x100mL
產(chǎn)品簡介：
Lympholyte-H 是一種密度梯度分離介質(zhì)， 專門用于從人外周血和臍帶血中分離活淋巴細胞和單核細胞。
應(yīng)用:
Lympholyte-H可以通過一種簡單的方法從人體血液中去除紅細胞和死細胞。Lympholyte-H還能去除大部分粒細胞( 包括中性粒細胞) 。由此高效和非選擇性地得到活的由人淋巴細胞和單核細胞組成細胞群。
說明:
Lympholyte-H是一種液體。產(chǎn)品經(jīng)過0. 22 μ m 過濾。內(nèi)毒素含量低。
參數(shù)：
成分：5.64% Polysucrose 400，9.65% Sodium Diatrizoate
密度：1.077±0.001g/cm3 @22攝氏度
pH：6.9±0.3
分離結(jié)果：活淋巴細胞的得率≥70%，剩余紅細胞≤10%。
存儲:
未開封常溫(22±3攝氏度)保存。開封后+4℃保存。始終避光保存。在有效期前使用。
注意:長期儲存可能會發(fā)生相分離。
使用前搖勻。靜置直到?jīng)]有氣泡(2-3 分鐘) 。在室溫下使用( 密度會隨溫度而變化)。
使用方法:
在室溫(約22℃)下使用Lympholyte-H 和選擇的無血清培養(yǎng)基(磷酸鹽緩沖鹽水，改良McCoy 's 培養(yǎng)基等)，并無菌操作。
1.在含有抗凝血劑或去纖維血的管中收集人血。
2.用等體積的培養(yǎng)基稀釋血液。
3.按方法A或方法B (見圖)將稀釋后的血液6毫升鋪在3毫升Lympholyte-H上面。使用10-15毫升離心管。
方法A: 在離心管中加入3 ml 的Lympholyte-H。使用移液管，小心地將6 毫升稀釋的血液分層鋪在Lympholyte-H上，在界面處盡可能少地混合( 圖a) 。由于Lympholyte-H的密度比細胞懸液大，將形成一個明顯的界面(圖C)。
方法B: 向離心管中加入6 毫升稀釋后的血液。將一個大的(23 厘米)巴斯德移液管置于管底(圖B)，慢慢向巴斯德移液管中加入Lympholyte-H，讓重力使其在稀釋的血液下面分層。繼續(xù)操作，直到3ml的Lympholyte-H在稀釋的血液下面分層。由于Lympholyte-H的密度比細胞懸液大，細胞懸液會在Lympholyte-H上方形成一層界面明顯的層(圖C)。
4.室溫下，800g 離心20 分鐘。
5. 離心后，界面處會有一層明顯可以看到的不透明的淋巴細胞層( 圖D) ，使用巴斯德移液管，小心地將細胞從界面中取出，轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
6.用培養(yǎng)基稀釋移取過來的細胞以降低溶液的密度。800g 離心10 分鐘，使淋巴細胞沉降到管底，扔棄上清。
注:如有需要，此時按下述步驟去除血小板:
A.加入0.5 ml 緩沖液和50 ul 凝血酶，然后輕輕重懸沉集的細胞。
B.加入10 毫升緩沖液，充分混合。
C.緩慢離心細胞(100 g)3 分鐘;血小板會結(jié)塊沉淀到底部。
D.提取上清液(含細胞)并置于另一管中，留下聚集的血小板。
另一方法,
A.將細胞(800克)離心1 分鐘，使細胞成粒。
B.倒出上清液，將得到的細胞重新懸吊在緩沖液中。
C.重復(fù)2 次。人們會注意到，每次這樣做，隨著血小板被去掉，上清液越來越透明。
7.在進一步處理之前，將淋巴細胞在培養(yǎng)基中洗滌2-3 次(在此階段可以使用含血清的培養(yǎng)基)。
