Lympholyte-M小鼠淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品貨號(hào)：CL5030
產(chǎn)品名稱：Lympholyte-M小鼠淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品規(guī)格：5x30mL/100mL/500mL
產(chǎn)品簡介：
Lympholyte-M是專門用于從小鼠脾臟、淋巴結(jié)、胸腺、骨髓、血液中分離淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的密度梯度分離液，產(chǎn)品經(jīng)過0.22um微孔過濾，無菌。
參數(shù)：
成分：Polysucrose 400和Sodium Diatrizoate
密度：1.0875±0.001g/cm3 22攝氏度
pH：6.9±0.3
分離結(jié)果：活淋巴細(xì)胞的得率≥70%，剩余紅細(xì)胞≤10%。
儲(chǔ)存條件：
未開蓋時(shí)，室溫保存；開蓋后，儲(chǔ)存于4攝氏度。但都要避光。
操作步驟：
注意：使用前充分搖晃混勻，靜止2-3min，待氣泡消失后試用。（室溫條件下使用分離液，分離液密度會(huì)隨溫度的變化而發(fā)生改變）
樣本制備可使用無血清培養(yǎng)基，減少樣本粘度，更利于分離。
1.用推薦的方法和培養(yǎng)基制備淋巴細(xì)胞懸液。
建議的方法：
a. 將脾切成小塊
b. 制備成組織勻漿
c. 通過細(xì)篩網(wǎng)過濾
其他組織：徹底勻漿，獲得干凈的懸浮液
2.將細(xì)胞濃度調(diào)整至每毫升最多2 x 107個(gè)有核細(xì)胞；
Note：如果細(xì)胞懸液中含有大量的碎片或紅細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1.0 x 107個(gè)細(xì)胞/mL，可得到更干凈的分離。
3.根據(jù)不同的方法進(jìn)行分離：
方法A：
①在離心管中加入5 mL Lympholyte?-M；
②使用移液管，小心地將5 mL的細(xì)胞懸液鋪在Lympholyte?-M上，在界面上盡可能少地混合（圖A）；
③由于Lympholyte?-M的密度比細(xì)胞懸液更大，因此將形成一個(gè)明顯的界面（圖C）。
方法B：
①在離心管中加入5 mL細(xì)胞懸液。將一個(gè)大的(23厘米）移液管放置到試管的底部（圖B）；
②慢慢地將Lympholyte?-M加入移液管中，重力將其置于細(xì)胞懸液下。繼續(xù)處理，直到5 mL Lympholyte?-M在細(xì)胞懸液下分層；
③由于Lympholyte?-M比細(xì)胞懸液密度更大，因此將形成一個(gè)明顯的界面（圖C）。
4.在室溫下，1000-1500g離心20分鐘；
5.離心后，在界面上將有一個(gè)明顯的淋巴細(xì)胞層（圖D）。用移液管，小心地將細(xì)胞從界面上吸出，并轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中；
6.用培養(yǎng)基稀釋分離的細(xì)胞，800g離心10分鐘，沉淀淋巴細(xì)胞，棄上清；
7.將淋巴細(xì)胞在培養(yǎng)基中清洗2-3次，隨后進(jìn)行進(jìn)一步處理。
