Lympholyte-H人淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品貨號(hào)：CL5020-R
產(chǎn)品名稱：Lympholyte-H人淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品規(guī)格：500mL/6x500mL
產(chǎn)品簡介：
Lympholyte-H 是一種密度梯度分離介質(zhì)， 專門用于從人外周血和臍帶血中分離活淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
應(yīng)用:
Lympholyte-H可以通過一種簡單的方法從人體血液中去除紅細(xì)胞和死細(xì)胞。Lympholyte-H還能去除大部分粒細(xì)胞( 包括中性粒細(xì)胞) 。由此高效和非選擇性地得到活的由人淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞組成細(xì)胞群。
說明:
Lympholyte-H是一種液體。產(chǎn)品經(jīng)過0. 22 μ m 過濾。內(nèi)毒素含量低。
參數(shù)：
成分：5.64% Polysucrose 400，9.65% Sodium Diatrizoate
密度：1.077±0.001g/cm3 @22攝氏度
pH：6.9±0.3
分離結(jié)果：活淋巴細(xì)胞的得率≥70%，剩余紅細(xì)胞≤10%。
存儲(chǔ):
未開封常溫(22±3攝氏度)保存。開封后+4℃保存。始終避光保存。在有效期前使用。
注意:長期儲(chǔ)存可能會(huì)發(fā)生相分離。
使用前搖勻。靜置直到?jīng)]有氣泡(2-3 分鐘) 。在室溫下使用( 密度會(huì)隨溫度而變化)。
使用方法:
在室溫(約22℃)下使用Lympholyte-H 和選擇的無血清培養(yǎng)基(磷酸鹽緩沖鹽水，改良McCoy 's 培養(yǎng)基等)，并無菌操作。
1.在含有抗凝血?jiǎng)┗蛉ダw維血的管中收集人血。
2.用等體積的培養(yǎng)基稀釋血液。
3.按方法A或方法B (見圖)將稀釋后的血液6毫升鋪在3毫升Lympholyte-H上面。使用10-15毫升離心管。
方法A: 在離心管中加入3 ml 的Lympholyte-H。使用移液管，小心地將6 毫升稀釋的血液分層鋪在Lympholyte-H上，在界面處盡可能少地混合( 圖a) 。由于Lympholyte-H的密度比細(xì)胞懸液大，將形成一個(gè)明顯的界面(圖C)。
方法B: 向離心管中加入6 毫升稀釋后的血液。將一個(gè)大的(23 厘米)巴斯德移液管置于管底(圖B)，慢慢向巴斯德移液管中加入Lympholyte-H，讓重力使其在稀釋的血液下面分層。繼續(xù)操作，直到3ml的Lympholyte-H在稀釋的血液下面分層。由于Lympholyte-H的密度比細(xì)胞懸液大， 細(xì)胞懸液會(huì)在Lympholyte-H上方形成一層界面明顯的層(圖C)。
4.室溫下，800g 離心20 分鐘。
5. 離心后， 界面處會(huì)有一層明顯可以看到的不透明的淋巴細(xì)胞層( 圖D) ，使用巴斯德移液管，小心地將細(xì)胞從界面中取出，轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
6.用培養(yǎng)基稀釋移取過來的細(xì)胞以降低溶液的密度。800g 離心10 分鐘，使淋巴細(xì)胞沉降到管底，扔棄上清。
注:如有需要，此時(shí)按下述步驟去除血小板:
A.加入0.5 ml 緩沖液和50 ul 凝血酶，然后輕輕重懸沉集的細(xì)胞。
B.加入10 毫升緩沖液，充分混合。
C.緩慢離心細(xì)胞(100 g)3 分鐘;血小板會(huì)結(jié)塊沉淀到底部。
D.提取上清液(含細(xì)胞)并置于另一管中，留下聚集的血小板。
另一方法,
A.將細(xì)胞(800 克)離心1 分鐘，使細(xì)胞成粒。
B.倒出上清液，將得到的細(xì)胞重新懸吊在緩沖液中。
C.重復(fù)2 次。人們會(huì)注意到，每次這樣做，隨著血小板被去掉，上清液越來越透明。
7.在進(jìn)一步處理之前，將淋巴細(xì)胞在培養(yǎng)基中洗滌2-3 次(在此階段可以使用含血清的培養(yǎng)基)。
