Lympholyte-Rat大鼠淋巴細胞分離液
產(chǎn)品貨號：CL5040
產(chǎn)品名稱：Lympholyte-Rat大鼠淋巴細胞分離液
產(chǎn)品規(guī)格：5x30 mL/100mL/500mL
產(chǎn)品簡介：
Lympholyte-Rat是專門用于從大鼠淋巴組織或血液中分離淋巴細胞和單核細胞的密度梯度分離液。
參數(shù)：
成分：Polysucrose 400和Sodium Diatrizoate
密度：1.094±0.001g/cm3 22攝氏度
pH：6.9±0.3
分離結果：活淋巴細胞的得率≥70%，剩余紅細胞≤15%。
儲存條件：
未開蓋時，室溫保存；開蓋后，儲存于4攝氏度。但都要避光。
操作步驟：
注意：樣本制備可使用無血清培養(yǎng)基，減少樣本粘度，更利于分離。
1.用推薦的方法和培養(yǎng)基準備一個淋巴細胞懸液。
建議的方法：
a.將脾臟切成小塊
b.制備成組織勻漿
c.通過細篩網(wǎng)過濾
其他組織：徹底勻漿，獲得干凈的懸浮液。
2.將細胞濃度調(diào)整為每毫升最多2 x 107個有核細胞。
注意：如果細胞懸液中含有大量的碎片或紅細胞，如果細胞濃度設置為1.0 x 107個細胞/mL，可得到更干凈的分離。
3.根據(jù)不同的方法進行分離：
方法A：
①向離心管中加入5 mL Lympholyte?-Rat；
②使用移液管，小心地將5 mL細胞懸液鋪在Lympholyte?-Rat上，在界面上盡可能少地混合（圖A）；
③由于Lympholyte?-Rat的密度比細胞懸液更大，因此將形成一個明顯的界面（圖C）。
方法B：
①在離心管中加入5 mL細胞懸液。將一個大的(23厘米）移液管放置到試管的底部（圖B）；
②慢慢地將Lympholyte?-Rat加入移液管中，重力將其置于細胞懸液下。繼續(xù)直到5 mL Lympholyte?-Rat在細胞懸液下分層；
③由于Lympholyte?-Rat比細胞懸液密度更大，因此將形成一個明顯的界面（圖C）。
4.在室溫下，1000-1500g離心20分鐘；
5.離心后，在界面上將有一個明顯的淋巴細胞層（圖D）。使用移液管，小心地將細胞從界面上吸出，并轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中；
6.用培養(yǎng)基稀釋重懸細胞。800g離心10分鐘，沉淀淋巴細胞，然后棄用上清液；
7.在進一步處理之前，在培養(yǎng)基中清洗淋巴細胞2-3次（現(xiàn)在可以使用含有血清的培養(yǎng)基）2-3次。
