Lympholyte-Rabbit兔淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品貨號(hào)：CL5050
產(chǎn)品名稱：Lympholyte-Rabbit兔淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品規(guī)格：5x30mL
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Lympholyte-Rabbit是專門用于從兔組織或血液中分離淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的密度梯度分離液。
參數(shù)：
成分：Polysucrose 400和Sodium Diatrizoate
密度：1.0965±0.001g/cm3 22攝氏度
pH：6.9±0.3
分離結(jié)果：活淋巴細(xì)胞的得率≥70%，剩余紅細(xì)胞≤15%。
儲(chǔ)存條件：
未開蓋時(shí)，室溫保存；開蓋后，儲(chǔ)存于4攝氏度。但都要避光。
注意：室溫條件下使用分離液；樣本制備可使用無血清培養(yǎng)基，減少樣本粘度，更利于分離。
操作步驟：
1. 用推薦的方法和培養(yǎng)基制備淋巴細(xì)胞懸液。
建議的方法：
a）將脾切成小塊
b）制備成組織勻漿
c）通過細(xì)篩網(wǎng)過濾
其他組織：徹底勻漿，獲得干凈的懸浮液
2.將細(xì)胞濃度調(diào)整至每毫升最多5x 106個(gè)有核細(xì)胞；
Note：如果細(xì)胞懸液中含有大量的碎片或紅細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2.5 x 106個(gè)細(xì)胞/mL，可得到更干凈的分離。
3.根據(jù)不同的方法進(jìn)行分離：
方法A：
①在離心管中加入5 mL Lympholyte?-Rabbit；
②使用移液管，小心地將5mL細(xì)胞懸液鋪在Lympholyte?-Rabbit上，在液面上盡可能少地混合（圖A）；
③由于Lympholyte?-Rabbit的密度比細(xì)胞懸液更大，因此將形成一個(gè)明顯的界面（圖C）。
方法B：
①在離心管中加入5mL的細(xì)胞懸液。將一個(gè)大的(23厘米）移液管放置到試管的底部（圖B）；
②慢慢地向移液管中加入Lympholyte?-Rabbit，重力使其在稀釋的血液下分層；
③繼續(xù)處理，直到5mL Lympholyte?-Rabbit在細(xì)胞懸液分層。由于Lympholyte?-Rabbit比細(xì)胞懸液密度更大，因此會(huì)形成明顯的界面（圖C）；
4.在室溫下，以1500g離心30分鐘；
5.離心后，界面上將有一個(gè)明顯的淋巴細(xì)胞層（圖D）。使用移液管，小心地將細(xì)胞吸出，并轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中；
6.用培養(yǎng)基稀釋轉(zhuǎn)移的細(xì)胞，以降低溶液的密度。800g離心10分鐘，沉淀淋巴細(xì)胞，然后棄用上清液；
7. 在進(jìn)一步處理之前，在培養(yǎng)基中清洗淋巴細(xì)胞2-3次（在這個(gè)階段可以使用含有血清的培養(yǎng)基）。
