Lympholyte-Mammal哺乳動(dòng)物淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品貨號(hào)：CL5110產(chǎn)品名稱：Lympholyte-Mammal哺乳動(dòng)物淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品規(guī)格：5 x 30 mL/100 mL/500mL
產(chǎn)品簡介：
Lympholyte-Mammal哺乳動(dòng)物淋巴細(xì)胞分離液是專門用于從大多數(shù)哺乳動(dòng)物血液中分離淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的密度梯度分離液。無菌，經(jīng)0.22um過濾。
參數(shù)：
成分：Dextran 和Sodium Diatrizoate
密度：1.086±0.001g/cm3 22℃
pH：6.9±0.3
淋巴細(xì)胞的得率：40%-50%，紅細(xì)胞的含量≤5%
儲(chǔ)存條件：
未開蓋時(shí)，室溫儲(chǔ)存；開蓋后，4℃儲(chǔ)存。都要避光。
操作步驟：
1、將血液收集在含有抗凝劑的試管中。
Note: 如果在Alsever采集血液，使用 1:1 的比例。1400g 離心10分鐘。吸出上清液并丟棄。將沉淀重懸在2倍原始血量的PBS重懸。繼續(xù)執(zhí)行步驟3。
2、用同體積的PBS稀釋血液（1：1）
3、根據(jù)Method A 或Method B，將4mL稀釋的血液鋪在3mL的Lympholyte?-Mammal 上（見圖）。（使用10-15ml 離心管）
Method A：在離心管中加入3ml Lympholyte?-Mammal。使用移液器小心地將4 mL稀釋的血液鋪在Lympholyte?-Mammal上，在界面處盡可能少的混合（圖A）。由于 Lympholyte?-Mammal 的密度比細(xì)胞懸液大，因此會(huì)形成明顯的界面（圖C）。
Method B：向離心管中加入4ml 稀釋的血液。將一個(gè)移液器放在試管底部（圖 B）。慢慢地將 Lympholyte?-Mammal添加到吸管中，讓重力使其在稀釋的血液下分層。繼續(xù)操作，直到3mL的 Lympholyte?-Mammal鋪在稀釋的血液下。由于 Lympholyte?-Mammal 的密度大于細(xì)胞懸液，因此細(xì)胞懸液將在 Lympholyte?-Mammal 上方形成明顯的界面（圖 C）。
4、室溫800g離心20min
5、離心后，界面處會(huì)有清晰的淋巴細(xì)胞層（圖D）。用吸管小心地從離心管中取出細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
6、用培養(yǎng)基或者PBS稀釋轉(zhuǎn)移的細(xì)胞以降低溶液的密度。以800g離心10分鐘以沉淀淋巴細(xì)胞，然后棄去上清液。
Note：如果需要，在這一步我們可以去除血小板。
A. 加入 0.5mL緩沖液和 50uL凝血酶，然后輕輕重懸沉淀。
B. 用緩沖液補(bǔ)足10mL并充分混合。
C. 非常緩慢地（100 g）離心細(xì)胞3分鐘；血小板會(huì)聚集并沉降到底部。
D. 抽出上清液（包含細(xì)胞）并放入另一個(gè)試管中，留下聚集的血小板。
Note：
1、對(duì)于緩沖液，您可以使用 PBS，或您在整個(gè)Lympholyte Mammal操作中一直使用的任何無血清培養(yǎng)基。
2、凝血酶激活血小板導(dǎo)致結(jié)塊并在低速離心時(shí)易于去除。
或者，
A. 將細(xì)胞 (800g) 離心1分鐘以沉淀細(xì)胞。
B. 倒出上清液并將所得細(xì)胞重懸于緩沖液中。
C. 再重復(fù)2次。這個(gè)時(shí)候會(huì)觀察到，每次這樣做時(shí)，隨著血小板被去除，產(chǎn)生的上清液會(huì)變得更加清澈。
7、洗淋巴細(xì)胞2-3次
